| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 第一部分 肺癌患者胸水 TILS 及外周血 PBLS 与健康人 PBLS TCR VΒ亚家族的表达对比 | 第16-29页 |
| 引言 | 第16页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·样本 | 第16页 |
| ·试剂 | 第16-17页 |
| ·仪器 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-22页 |
| ·实验样本收集 | 第18页 |
| ·肺癌患者胸水 T 细胞分离 | 第18页 |
| ·流式检测患者外周血以及胸水淋巴细胞 | 第18-19页 |
| ·Gexp 检测患者外周血以及胸水淋巴细胞 | 第19-22页 |
| ·统计学分析 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-28页 |
| ·临床样本资料 | 第22页 |
| ·流式检测肺癌患者外周血及胸水与健康人外周血 T 细胞 Vβ亚家族的表达 | 第22-24页 |
| ·流式检测肺癌患者 HLA-A2 型别 | 第24-25页 |
| ·Gexp 检测健康人与肺癌患者外周血及胸水 T 细胞 Vβ亚家族的表达情况 | 第25-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第二部分 TCR VΒ8 基因克隆以及穿梭质粒 PDC315-VΒ8 的构建 | 第29-37页 |
| 引言 | 第29页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·质粒、菌株、细胞和试剂 | 第29页 |
| ·仪器 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-33页 |
| ·TCR Vβ8.1 基因的获得 | 第30-33页 |
| ·穿梭质粒 pDC315-Vβ8.1 的构建 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-35页 |
| ·PBMC 中获取 TCR Vβ8 基因 | 第33-34页 |
| ·质粒 pDC315- Vβ8 构建 | 第34-35页 |
| ·重组质粒序列测定 | 第35页 |
| ·小结 | 第35-37页 |
| 第三部分 重组嵌合型腺病毒 AD5/F35 的包装、鉴定以及滴度测定 | 第37-43页 |
| 引言 | 第37页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·质粒、细胞和试剂 | 第37页 |
| ·仪器 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35.TCR Vβ8.1-VJ1.3 的包装 | 第37-38页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35-TCR Vβ8.1-VJ1.3 目的基因鉴定和表达检测 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| ·HEK-293 细胞包装腺病毒 | 第39-40页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35. TCR Vβ 8 的 PCR 鉴定 | 第40页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35. TCR Vβ 8 的流式鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35. TCR Vβ 8 层析纯化及滴度测定 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第四部分 HLA-A2 肺腺癌细胞 NCI-H1299 和 A549 的构建 | 第43-48页 |
| 引言 | 第43页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·质粒、菌株、细胞和试剂 | 第43页 |
| ·仪器 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·HLA-A2 基因获得和 pcDNA3.1-HLA-A2 载体构建 | 第44页 |
| ·HLA-A2 肺腺癌细胞株 NCI-H1299 和 A549 的构建 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-47页 |
| ·重组质粒 pcDNA3.1-HLA-A2 的构建 | 第45-46页 |
| ·重组质粒序列测定 | 第46页 |
| ·G418 筛选稳定转染细胞株 | 第46页 |
| ·流式检测 HLA-A2 表达结果 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第五部分 重组腺病毒的抗瘤谱 | 第48-55页 |
| 引言 | 第48页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·细胞和试剂 | 第48页 |
| ·仪器 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-49页 |
| ·MTT 比色法检测重组腺病毒 Ad5/F35.TCRVβ8.1-VJ1.3 感染的 PBMC 对肿瘤细胞的杀伤效果 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-53页 |
| ·MTT 比色法检测重组嵌合型腺病毒感染的 PBMC 对肺腺癌、肝癌和乳腺癌细胞株的杀伤作用 | 第49-53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录一 英文缩略词表 | 第65-66页 |
| 附录二 质粒图谱 | 第66-70页 |
| 附录三 引物列表 | 第70-72页 |
| 附录四 攻读学位期间发表的论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
