| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 斯钙素的研究进展 | 第12-17页 |
| ·斯钙素的发现与功能概述 | 第12页 |
| ·斯钙素的结构 | 第12-13页 |
| ·斯钙素的表达及定位 | 第13-14页 |
| ·斯钙素的主要生理作用 | 第14-17页 |
| ·STC1与钙磷 | 第14-15页 |
| ·STC1与泌尿系统 | 第15-16页 |
| ·STC1与妊娠 | 第16页 |
| ·STC1与运动系统 | 第16-17页 |
| ·STC1与肿瘤 | 第17页 |
| 2 胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的研究进展 | 第17-19页 |
| ·IGF-1的发现 | 第17-18页 |
| ·IGF-1的结构 | 第18页 |
| ·IGF-1的主要功能 | 第18-19页 |
| ·IGF-1与生长发育 | 第18-19页 |
| ·IGF-1与代谢作用 | 第19页 |
| 3 Caco2细胞的研究进展 | 第19-20页 |
| 4 斯钙素1、IGF-1参与钙磷稳态调节的研究进展 | 第20-21页 |
| 5 荧光定量PCR技术 | 第21-23页 |
| ·荧光定量PCR技术原理 | 第21页 |
| ·相对定量PCR | 第21-22页 |
| ·绝对定量PCR | 第22-23页 |
| 第二部分 实验研究部分 | 第23-55页 |
| 1 前言 | 第23页 |
| 2 实验材料 | 第23-28页 |
| ·细胞系 | 第23页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·主要溶液培养基及其配置 | 第25-28页 |
| ·IMDM培养液的配制 | 第25页 |
| ·PBS平衡盐溶液的配制和消毒 | 第25-26页 |
| ·D-Hanks溶液配置和消毒 | 第26页 |
| ·0.25%胰蛋白酶消化液的配制和灭菌 | 第26页 |
| ·LB培养基的配置 | 第26-27页 |
| ·0.1mol/L CaCl_2溶液和0.1mol/L CaCl_2-15%甘油溶液的配制 | 第27页 |
| ·电泳缓冲液TAE的配制 | 第27-28页 |
| 3 实验方法 | 第28-41页 |
| ·Caco2细胞的培养 | 第28页 |
| ·质粒标准品的构建 | 第28-34页 |
| ·感受态菌的制备 | 第28-29页 |
| ·总RNA的提取和STC1基因扩增 | 第29-32页 |
| ·TA克隆及转化 | 第32-33页 |
| ·质粒少量提取 | 第33页 |
| ·质粒标准品的PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·IGF-1最适浓度的选取 | 第34-36页 |
| ·实验分组 | 第34页 |
| ·RNA的提取与荧光定量PCR | 第34-36页 |
| ·不同时间相同浓度IGF-1处理Caco2细胞 | 第36页 |
| ·绝对定量PCR | 第36-38页 |
| ·建立标准曲线 | 第36-37页 |
| ·RNA、cDNA浓度测定 | 第37-38页 |
| ·绝对定量 | 第38页 |
| ·蛋白提取 | 第38-39页 |
| ·细胞裂解提取总蛋白 | 第38页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第38-39页 |
| ·Western blot | 第39-41页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第39页 |
| ·免疫印迹操作-转膜 | 第39-40页 |
| ·免疫检测 | 第40-41页 |
| ·化学发光与曝光 | 第41页 |
| 4 实验结果与分析 | 第41-51页 |
| ·质粒标准品的构建 | 第41-43页 |
| ·目的片段的提取 | 第41-42页 |
| ·质粒标准品的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| ·质粒标准品的测序鉴定 | 第43页 |
| ·建立标准曲线结果 | 第43-45页 |
| ·质粒标准品拷贝数的测定结果 | 第43-44页 |
| ·绘制标准曲线结果 | 第44-45页 |
| ·RNA的提取 | 第45页 |
| ·IGF-1最适浓度选取相对定量及Western blot结果 | 第45-48页 |
| ·相对定量结果 | 第45-47页 |
| ·Western blot结果 | 第47-48页 |
| ·最适浓度IGF-1分不同时间处理Caco2细胞的绝对定量及western blot结果 | 第48-51页 |
| ·绝对定量结果 | 第48-49页 |
| ·Western blot结果 | 第49-51页 |
| 5 讨论 | 第51-54页 |
| ·绝对定量标准曲线的制备 | 第51页 |
| ·IGF-1最适浓度的选取 | 第51-52页 |
| ·最适浓度IGF-1分不同时间处理Caco2细胞 | 第52-54页 |
| 6 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附录 | 第61页 |
