| 缩略语表 | 第1-12页 |
| 中文摘要 | 第12-15页 |
| Abstract | 第15-19页 |
| 前言 | 第19-21页 |
| 文献回顾 | 第21-37页 |
| 1.肝脏与能量代谢平衡调节 | 第21-32页 |
| ·肝脏与糖的代谢 | 第21-27页 |
| ·饱食时肝脏糖代谢分子机制 | 第22-25页 |
| ·饥饿时肝脏糖代谢分子机制 | 第25-27页 |
| ·肝脏与脂肪酸的代谢 | 第27-32页 |
| ·饱食时肝脏脂肪酸代谢分子机制 | 第29-31页 |
| ·饥饿时肝脏脂肪酸代谢分子机制 | 第31-32页 |
| 2.转录后调节与 QKI | 第32-37页 |
| ·转录后调节 | 第32-33页 |
| ·QKI 的结构与功能 | 第33-37页 |
| ·QKI 的结构 | 第33-34页 |
| ·QKI 的表达 | 第34-35页 |
| ·QKI 的功能 | 第35-37页 |
| 第一部分 RNA 结合蛋白 QKI 在饥饿肝脏中的表达变化 | 第37-45页 |
| 引言 | 第37页 |
| 1．材料与仪器 | 第37-38页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| 2.方法 | 第38-42页 |
| ·小鼠饥饿模型的建立与肝脏组织的获取 | 第38页 |
| ·免疫组织化学 | 第38-39页 |
| ·细胞饥饿模型 | 第39页 |
| ·细胞培养 | 第39页 |
| ·F/D 诱导的细胞饥饿信号活化模型 | 第39页 |
| ·细胞低糖模型 | 第39页 |
| ·实时定量 PCR（quantitative Real-Time-PCR，qRT-PCR） | 第39-41页 |
| ·组织/细胞 RNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·RNA 反转录为 cDNA | 第40页 |
| ·qRT-PCR | 第40-41页 |
| ·免疫印迹（Western-blot） | 第41-42页 |
| ·组织/细胞蛋白提取 | 第41页 |
| ·蛋白定量 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE 电泳及转膜 | 第42页 |
| ·抗体杂交及结果读取 | 第42页 |
| 3.结果 | 第42-44页 |
| ·QKI 在小鼠肝脏的表达 | 第42-43页 |
| ·QKI 在细胞饥饿模型中的表达 | 第43-44页 |
| 4.讨论 | 第44-45页 |
| 第二部分 饥饿条件下，肝脏 QKI 乙酰化修饰的初步探讨 | 第45-51页 |
| 引言 | 第45页 |
| 1．材料与仪器 | 第45-46页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| 2.方法 | 第46-48页 |
| ·QKI5 全长氨基酸乙酰化修饰位点预测 | 第46页 |
| ·饥饿模型建立 | 第46-47页 |
| ·动物饥饿模型 | 第46页 |
| ·细胞饥饿模型 | 第46-47页 |
| ·乙酰化抗体免疫共沉淀（Immunoprecipitation，IP） | 第47页 |
| ·IP 产物的 Western-blot 检测 | 第47-48页 |
| 3.结果 | 第48-49页 |
| ·QKI5 氨基酸乙酰化修饰位点预测 | 第48页 |
| ·饥饿模型下，QKI5 乙酰化水平检测 | 第48-49页 |
| 4.讨论 | 第49-51页 |
| 第三部分 SIRT1 对 QKI 乙酰化水平的影响 | 第51-58页 |
| 引言 | 第51页 |
| 1．材料与仪器 | 第51-52页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51-52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| 2.方法 | 第52-55页 |
| ·Sirt1 对 QKI 乙酰化水平的调节作用 | 第52-54页 |
| ·细胞培养 | 第52页 |
| ·Sirt1 激动剂和抑制剂的使用 | 第52-53页 |
| ·Sirt1 小干涉 RNA 的合成 | 第53页 |
| ·siRNA 转染到细胞 | 第53页 |
| ·乙酰化抗体 IP 试验 | 第53页 |
| ·IP 产物的 Western-blot 检测 | 第53-54页 |
| ·QKI 与 Sirt1 蛋白的相互作用研究（co-IP 试验） | 第54-55页 |
| ·抗体与 Protein A 磁珠的共价交联 | 第54页 |
| ·蛋白样本的制备 | 第54页 |
| ·免疫共沉淀 | 第54-55页 |
| ·Western-blot 查看结果 | 第55页 |
| 3.结果 | 第55-56页 |
| ·Sirt1 对 QKI 乙酰化水平的调节 | 第55-56页 |
| ·饥饿模型下，QKI5 与 Sirt1 的相互作用 | 第56页 |
| 4.讨论 | 第56-58页 |
| 第四部分 不同水平 QKI 乙酰化修饰对肝细胞重要代谢分子的影响 | 第58-69页 |
| 引言 | 第58页 |
| 1．材料与仪器 | 第58-60页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-59页 |
| ·主要仪器 | 第59-60页 |
| 2.方法 | 第60-64页 |
| ·QKI 干涉慢病毒载体构建和包装 | 第60-61页 |
| ·干涉序列的设计 | 第60页 |
| ·干涉序列克隆到 pLKO.1 慢病毒干涉载体 | 第60-61页 |
| ·shQKI 慢病毒包装 | 第61页 |
| ·Lenti-shQKI 感染 HepG2 和阳性感染细胞的筛选 | 第61页 |
| ·QKI 过表达/突变体慢病毒载体的构建和包装 | 第61-63页 |
| ·QKI5 乙酰化位点突变载体构建 | 第61-62页 |
| ·慢病毒包装 | 第62-63页 |
| ·慢病毒介导目的分子表达的 HepG2 细胞筛选 | 第63页 |
| ·Western-blot 验证慢病毒的有效性 | 第63页 |
| ·突变慢病毒载体的乙酰化 IP | 第63页 |
| ·代谢相关分子的表达检测 | 第63-64页 |
| 3.结果 | 第64-67页 |
| ·QKI 干涉、过表达及乙酰化位点突变慢病毒载体的构建和验证 | 第64-65页 |
| ·饥饿模型下，干涉/过表达/乙酰化位点突变 QKI 对肝脏代谢效应分子的影响 | 第65-67页 |
| 4.讨论 | 第67-69页 |
| 第五部分 QKI 影响肝脏饥饿代谢的机制探讨 | 第69-76页 |
| 引言 | 第69页 |
| 1.材料与仪器 | 第69-70页 |
| ·实验材料 | 第69页 |
| ·主要试剂 | 第69-70页 |
| ·主要仪器 | 第70页 |
| 2.方法 | 第70-71页 |
| ·qRT-PCR 检测肝脏代谢相关转录因子/转录共调节子 | 第70-71页 |
| ·QKI 与下游分子的 RNA-IP 试验 | 第71页 |
| 3.结果 | 第71-75页 |
| ·代谢重要转录因子/转录共调节子的 3 UTR QRE 预测 | 第71-72页 |
| ·QKI5 影响肝脏饥饿代谢的直接下游分子筛选 | 第72-75页 |
| 4.讨论 | 第75-76页 |
| 第六部分 QKI 对 FOXO1 和 PPARΑ的转录后调节机制探讨 | 第76-84页 |
| 引言 | 第76页 |
| 1．材料与仪器 | 第76-77页 |
| ·实验材料 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76-77页 |
| ·主要仪器 | 第77页 |
| 2.方法 | 第77-80页 |
| ·QKI5 对 FOXO1 和 PPARα mRNA 的表达调控 | 第77页 |
| ·FOXO1 和 PPARα的 3 UTR 荧光报告基因试验 | 第77-80页 |
| ·pGL3-Promoter 载体的改构 | 第77-78页 |
| ·FOXO1 和 PPARα的 3 UTR 序列分析与片段克隆 | 第78-79页 |
| ·报告基因试验 | 第79-80页 |
| 3.结果 | 第80-82页 |
| ·QKI 对 FOXO1 和 PPARα mRNA 的表达调控 | 第80页 |
| ·QKI 对 FOXO1 和 PPARα的 mRNA3 UTR 区的调节 | 第80-82页 |
| 4.讨论 | 第82-84页 |
| 小结 | 第84-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 个人简历和研究成果 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
