| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词英文对照表 | 第9-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 EMCV的生物学特征 | 第13-17页 |
| ·EMCV病毒的颗粒组成 | 第13-14页 |
| ·EMCV病毒的基因组结构及编码蛋白的相关功能 | 第14-16页 |
| ·EMCV非编码区的组成在病毒转录复制中的作用 | 第16-17页 |
| 2 EMCV对动物的致病性 | 第17-18页 |
| 3 EMCV的致病机制及相关的影响因素 | 第18-19页 |
| 4 EMCV的流行情况及特点 | 第19-20页 |
| 5 EMCV的诊断及防治 | 第20页 |
| 6 EMCV疫苗研究 | 第20-21页 |
| 7 腺病毒载体在免疫制剂中的应用 | 第21页 |
| 8 本论文研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 试验研究 | 第22-59页 |
| 第一章 脑心肌炎病毒VP1基因的生物信息学分析 | 第22-27页 |
| 1 材料及软件 | 第22页 |
| ·VP1基因序列的获得 | 第22页 |
| ·VP1蛋白的理化性质及结构预测 | 第22页 |
| ·VP1基因系统进化分析 | 第22页 |
| ·VP1蛋白抗原表位的预测 | 第22页 |
| ·VP1蛋白跨膜结构域分析 | 第22页 |
| 2 结果 | 第22-26页 |
| ·VP1蛋白的理化性质分析结果 | 第22-23页 |
| ·VP1蛋白疏水性及二级结构的分析 | 第23-24页 |
| ·VP1蛋白的三级结构预测结果 | 第24页 |
| ·VP1蛋白基因的进化树分析 | 第24-25页 |
| ·VP1蛋白的抗原表位预测 | 第25-26页 |
| ·VP1蛋白的跨膜结构分析 | 第26页 |
| 3 小结 | 第26-27页 |
| 第二章 重组腺病毒载体pAd-VP1-EGFP的构建及鉴定 | 第27-38页 |
| 1 材料及仪器设备 | 第27-28页 |
| ·材料及试剂 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27-28页 |
| 2 实验步骤及方法 | 第28-34页 |
| ·pYr-ads-4-VP1穿梭载体的构建及鉴定 | 第28-32页 |
| ·pAd-VP1-EGFP重组腺病毒载体的构建及鉴定 | 第32-34页 |
| 3 结果 | 第34-36页 |
| ·VP1基因的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·pYr-ads-4-VP1穿梭载体的鉴定 | 第35-36页 |
| ·pAd-VP1-EGFP重组腺病毒载体的鉴定 | 第36页 |
| 4 小结与分析 | 第36-38页 |
| 第三章 rAd-VP1-EGFP在HEK293细胞中包装 | 第38-45页 |
| 1 材料 | 第38页 |
| ·材料及试剂 | 第38页 |
| ·仪器设备 | 第38页 |
| 2 实验步骤及方法 | 第38-41页 |
| ·pAd-VP1-EGFP重组腺病毒载体的线性化 | 第38-39页 |
| ·线性化的pAd-VP1-EGFP转染HEK 293细胞 | 第39页 |
| ·重组腺病毒rAd-VP1-EGFP的大量扩增 | 第39-40页 |
| ·重组腺病毒rAd-VP1-EGFP基因组的PCR验证 | 第40-41页 |
| ·重组腺病毒rAd-VP1-EGFP TCID_(50)的测定 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-43页 |
| ·重组腺病毒rAd-VP1-EGFP基因组验证 | 第41-42页 |
| ·重组腺病毒rAd-VP1-EGFP的包装 | 第42页 |
| ·重组腺病毒rAd-VP1-EGFP TCID_(50)的测定 | 第42-43页 |
| 4 小结与分析 | 第43-45页 |
| 第四章 rAd-VP1-EGFP感染CHO-K1细胞 | 第45-54页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| ·材料及试剂 | 第45页 |
| ·仪器设备 | 第45-46页 |
| 2 实验步骤及方法 | 第46-49页 |
| ·重组腺病毒rAd-VP1-EGFP感染不同细胞的比较 | 第46页 |
| ·VP1基因的过表达检测 | 第46-48页 |
| ·VP1蛋白表达的WB检测 | 第48-49页 |
| ·VP1蛋白的IFA检测 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-53页 |
| ·重组腺病毒rAd-VP1-EGFP感染不同细胞 | 第49-50页 |
| ·重组腺病毒rAd-VP1-EGFP感染CHO-K1细胞 | 第50-51页 |
| ·VP1基因的过表达验证 | 第51-52页 |
| ·VP1蛋白的WB验证 | 第52页 |
| ·VP1蛋白的IFA检测 | 第52-53页 |
| 4 小结 | 第53-54页 |
| 第五章 重组腺病毒rAd-VP1-EGFP免疫小鼠及免疫效果的初步研究 | 第54-59页 |
| 1 材料及试剂的配制 | 第54页 |
| ·材料及设备 | 第54页 |
| ·主要溶液 | 第54页 |
| 2 实验步骤及方法 | 第54-56页 |
| ·腺病毒载体pAd-EGFP及EMCV病毒TCID50的测定 | 第54-55页 |
| ·重组腺病毒rAd-VP1-EGFP免疫小鼠 | 第55页 |
| ·EMCV感染小鼠 | 第55页 |
| ·ELISA检测免疫后小鼠的中和抗体 | 第55-56页 |
| ·重组腺病毒rAd-VP1-EGFP对小鼠的攻毒保护 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-58页 |
| ·免疫前小鼠的VP1特异性抗体和中和抗体水平 | 第56-57页 |
| ·小鼠对EMCV的攻毒保护 | 第57-58页 |
| 4 小结 | 第58-59页 |
| 第三部分 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66-67页 |
| 硕士期间已发表论 | 第67页 |
