| 符号说明 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-28页 |
| ·布鲁氏菌病概述 | 第12-22页 |
| ·布鲁氏菌的历史 | 第12-13页 |
| ·布鲁氏菌的分类 | 第13页 |
| ·布鲁氏菌的生物学和理化特性 | 第13-14页 |
| ·布鲁氏菌的致病机理 | 第14-16页 |
| ·布鲁氏菌的危害和我国的疫情分布 | 第16-17页 |
| ·布鲁氏菌病的传播 | 第17页 |
| ·布鲁氏菌病的症状 | 第17-18页 |
| ·布鲁氏菌病的诊断 | 第18-21页 |
| ·凝集试验 | 第18页 |
| ·补体结合试验（CFT） | 第18-19页 |
| ·荧光偏振试验（FPA） | 第19页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELSIA） | 第19-20页 |
| ·分子生物学诊断技术—PCR | 第20-21页 |
| ·胶体金免疫层析技术（GICA） | 第21页 |
| ·布鲁氏菌的防治和治疗 | 第21-22页 |
| ·布鲁氏菌抗感染免疫研究进展 | 第22-24页 |
| ·非特异性免疫 | 第22-23页 |
| ·巨噬细胞 | 第22页 |
| ·补体 | 第22页 |
| ·自然杀伤性细胞 | 第22-23页 |
| ·Nramp1 基因 | 第23页 |
| ·特异性免疫 | 第23-24页 |
| ·CD4+T、CD8+T | 第23页 |
| ·几种免疫因子 | 第23-24页 |
| ·布鲁氏菌的主要致病因子 | 第24-27页 |
| ·Ⅳ型分泌系统 | 第24-25页 |
| ·应激反应蛋白 | 第25-26页 |
| ·密度感应系统 | 第26页 |
| ·BvrR/BvrS 双组分系统 | 第26-27页 |
| ·本实验研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-44页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·菌株、质粒和血清 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28-29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·常用溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-44页 |
| ·布鲁氏菌 DNA 模板的提取 | 第30-31页 |
| ·引物的设计与合成 | 第31页 |
| ·Virb8 基因的扩增与回收 | 第31-33页 |
| ·virb8 基因的扩增 | 第31页 |
| ·扩增产物的鉴定 | 第31-32页 |
| ·目的基因 virb8 的胶回收 | 第32-33页 |
| ·克隆载体的构建 | 第33-36页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·pEASY-T3 与 virb8 的连接 | 第33-34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第34页 |
| ·阳性质粒的抽提 | 第34-35页 |
| ·质粒的双酶切鉴定 | 第35页 |
| ·质粒的测序鉴定 | 第35-36页 |
| ·基因重组表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·表达载体与重组质粒的双酶切 | 第36页 |
| ·表达载体与目的基因片段的连接 | 第36页 |
| ·重组表达载体的转化 | 第36-37页 |
| ·阳性克隆的筛选、重组表达质粒的抽提及 PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第37页 |
| ·pET-32a(+)-virb8 蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第37-39页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第39页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·菌液的诱导表达 | 第39页 |
| ·样品的处理 | 第39-40页 |
| ·纯化步骤 | 第40页 |
| ·重组蛋白 pET-32a-virb8 的 Western Blot 鉴定 | 第40-42页 |
| ·pET-32a-virb8 的聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第40页 |
| ·转膜 | 第40-41页 |
| ·封闭 | 第41页 |
| ·洗涤 | 第41页 |
| ·加底物显色 | 第41-42页 |
| ·牛布鲁氏菌间接 ELISA 检测方法的建立 | 第42-44页 |
| 3 结果 | 第44-51页 |
| ·Virb8 基因的 PCR 扩增 | 第44页 |
| ·pET-32a-Virb8 的构建及鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白 Virb8 的表达及纯化 | 第45-46页 |
| ·Virb8 重组蛋白的 Western-blotting 检测 | 第46页 |
| ·最佳抗原和血清稀释度的确定 | 第46-47页 |
| ·抗原最佳包被条件的确定 | 第47页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第47-48页 |
| ·iELISA 阴阳性临界值的确定 | 第48-49页 |
| ·敏感性试验 | 第49页 |
| ·重复性试验 | 第49-50页 |
| ·对比试验 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 6 参考文献 | 第54-62页 |
| 7 致谢 | 第62-63页 |
| 8 在读期间发表学术论文 | 第63页 |
