| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-36页 |
| 1 玉米愈伤组织 | 第13-19页 |
| ·玉米愈伤组织的分类 | 第14-15页 |
| ·玉米愈伤组织的形成 | 第15-16页 |
| ·愈伤形成过程中的脱分化作用 | 第16-17页 |
| ·植物激素对脱分化作用的影响 | 第17-19页 |
| 2 植物miRNA | 第19-30页 |
| ·植物miRNA简介 | 第19-20页 |
| ·植物miRNA的特点 | 第20-21页 |
| ·植物miRNA的生物合成 | 第21-22页 |
| ·植物miRNA的作用机制 | 第22页 |
| ·植物miRNA的调控功能 | 第22-25页 |
| ·miRNA调控植物生长发育 | 第22-23页 |
| ·miRNA调节植物激素信号通路 | 第23-24页 |
| ·植物miRNA的胁迫响应 | 第24-25页 |
| ·植物miRNA研究方法 | 第25-30页 |
| ·植物miRNA的获得 | 第25页 |
| ·植物miRNA的表达检测 | 第25-30页 |
| 3 植物miRNA靶基因 | 第30-32页 |
| ·植物miRNA靶基因预测 | 第30页 |
| ·植物miRNA靶基因验证 | 第30-31页 |
| ·miRNA靶基因降解组测序 | 第31-32页 |
| 4 miRNA与植物分生组织 | 第32-34页 |
| 5 目的与意义 | 第34-35页 |
| 6 技术路线 | 第35-36页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第36-49页 |
| 1 实验材料 | 第36-39页 |
| ·供试玉米材料 | 第36页 |
| ·转化载体及宿主菌 | 第36-37页 |
| ·主要试剂 | 第37-39页 |
| ·试剂盒 | 第37页 |
| ·酶及相关试剂 | 第37-38页 |
| ·培养基及重要试剂配方 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-49页 |
| ·愈伤组织的诱导及取样 | 第39页 |
| ·总RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·总RNA样品的混合 | 第40页 |
| ·高通量测序 | 第40-43页 |
| ·华大Solexa深度测序 | 第41-42页 |
| ·降解组测序 | 第42-43页 |
| ·候选miRNA的表达验证 | 第43-45页 |
| ·miRNA的逆转录 | 第43-44页 |
| ·miRNA的实时荧光定量检测 | 第44-45页 |
| ·转基因验证 | 第45-49页 |
| ·miRNA过表达载体质粒转化农杆菌 | 第45页 |
| ·农杆菌转化胚性愈伤组织 | 第45-46页 |
| ·农杆菌转化茎尖分生组织 | 第46-47页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第47-48页 |
| ·目的基因功能初探 | 第48-49页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第49-80页 |
| 1 愈伤形成各阶段miRNA深度测序 | 第49-59页 |
| ·RNA样品检测结果 | 第49页 |
| ·高通量测序的小分子RNA序列信息 | 第49-51页 |
| ·基因表达的高通量测序结果 | 第51-52页 |
| ·新发现的玉米miRNA | 第52-55页 |
| ·已知miRNA家族的新成员 | 第55-56页 |
| ·各miRNA家族表达差异分析 | 第56-58页 |
| ·miRNA表达模式分析 | 第58-59页 |
| 2 愈伤形成各阶段miRNA表达量的定量验证 | 第59-70页 |
| ·内参基因及miRNA加尾产物扩增溶解曲线 | 第60-61页 |
| ·候选miRNA的相对表达量 | 第61-69页 |
| ·miRNA相对定量结果与测序结果间相关性分析 | 第69-70页 |
| 3 愈伤形成过程靶基因的降解组测序 | 第70-76页 |
| ·差异表达的靶基因的基本信息 | 第70-71页 |
| ·基因显著富集通路分析 | 第71-72页 |
| ·愈伤形成过程的重要生物学路径 | 第72-75页 |
| ·激素信号通路分析 | 第75-76页 |
| 4 转基因验证部分miRNA功能 | 第76-80页 |
| ·转基因阳性PCR检测 | 第76-78页 |
| ·部分转基因阳性植株愈伤诱导率鉴定 | 第78-80页 |
| 第四部分 讨论 | 第80-91页 |
| 1 鉴定玉米愈伤形成过程miRNA表达模式的作用 | 第80-82页 |
| ·重要意义 | 第80-81页 |
| ·应用前景 | 第81-82页 |
| 2 miRNA表达模式 | 第82-83页 |
| 3 部分差异miRNA作用机制 | 第83-85页 |
| ·zma-miR156 | 第83-84页 |
| ·zma-miR167和zma-miR393 | 第84页 |
| ·zma-miR319 | 第84-85页 |
| 4 miRNA调节激素信号转导途径在脱分化过程发挥作用 | 第85-87页 |
| 5 miRNA转基因验证结果讨论 | 第87-88页 |
| 6 展望 | 第88-91页 |
| 第五部分 结论 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-103页 |
| 附录1 已知miRNAs的高通量测序结果 | 第103-106页 |
| 附录2 已知miRNA家族新成员二级结构 | 第106-108页 |
| 附录3 降解组靶基因信息 | 第108-113页 |
| 附录4 植物激素信号转导 | 第113-114页 |
| 攻读学位期间发表论文及获得成果 | 第114页 |