| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| ·L-色氨酸概述 | 第7-8页 |
| ·色氨酸理化性质及生理生化作用 | 第7页 |
| ·L-色氨酸的应用 | 第7页 |
| ·L-色氨酸的生产方法 | 第7-8页 |
| ·大肠杆菌色氨酸代谢途径分析 | 第8-9页 |
| ·3 -脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸(DAHP)合成酶概述 | 第9-11页 |
| ·DAHP 合成酶种类 | 第9-10页 |
| ·DAHP 合成酶三维结构 | 第10页 |
| ·DAHP 合成酶催化机制 | 第10页 |
| ·DAHP 合成酶反馈调控机理 | 第10-11页 |
| ·代谢工程在 L-色氨酸生产中的应用 | 第11-12页 |
| ·本课题的立题意义与研究内容 | 第12-13页 |
| ·立题意义 | 第12页 |
| ·主要研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-19页 |
| ·材料 | 第13-14页 |
| ·菌株与质粒 | 第13页 |
| ·工具酶 | 第13页 |
| ·主要试剂及药品 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13页 |
| ·主要试剂配制 | 第13页 |
| ·主要实验仪器 | 第13-14页 |
| ·实验方法 | 第14-19页 |
| ·引物的设计与合成 | 第14页 |
| ·大肠杆菌 JM109 染色体的提取 | 第14-15页 |
| ·aroG~(fbr)突变基因的获得 | 第15-16页 |
| ·不同基因片段的扩增 | 第16页 |
| ·PCR 产物胶回收及质粒提取 | 第16页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第16页 |
| ·质粒的构建 | 第16-17页 |
| ·质粒稳定性检验 | 第17页 |
| ·目的蛋白表达鉴定 | 第17页 |
| ·基因重组菌株发酵生产色氨酸 | 第17页 |
| ·3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶酶活检测 | 第17-18页 |
| ·色氨酸合成酶酶活检测 | 第18页 |
| ·发酵液色氨酸检测方法 | 第18页 |
| ·乙酸检测方法 | 第18-19页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第19-38页 |
| ·色氨酸代谢途径关键酶 DAHP 合成酶基因的定点突变 | 第19-25页 |
| ·突变位点的理性设计 | 第19-20页 |
| ·DAHP 合成酶基因 aroG 的突变 | 第20-22页 |
| ·突变基因 aroG~(fbr)的表达鉴定 | 第22-25页 |
| ·色氨酸途径关键酶基因 aroG、aroG~(fbr)与 trpBA 的串联表达 | 第25-31页 |
| ·表达质粒 pEtac-aroG~(fbr)-tac-trpBA、pEtac-aroG~(fbr)-tac-trpBA 的构建 | 第25-27页 |
| ·目的蛋白表达鉴定 | 第27-28页 |
| ·色氨酸途径关键酶基因 aroG、aroG~(fbr)与 trpBA 表达效果分析 | 第28-30页 |
| ·不同重组菌色氨酸发酵验证 | 第30-31页 |
| ·质粒稳定性研究 | 第31页 |
| ·不同重组大肠杆菌色氨酸发酵优化 | 第31-38页 |
| ·溶氧对色氨酸关键酶表达强度影响的研究 | 第31-33页 |
| ·重组 E.coli JM109/ pEtac-aroG~(fbr)-tac -trpBA 发酵优化 | 第33-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-40页 |
| 主要结论 | 第38-39页 |
| 展望 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第44页 |
