英文缩略词表 | 第1-9页 |
摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
综述 | 第13-23页 |
1. 口蹄疫及其防控研究进展 | 第13-19页 |
·口蹄疫特点及流行状况 | 第13-14页 |
·口蹄疫病毒的结构特征 | 第14页 |
·口蹄疫病毒包装机理 | 第14-15页 |
·口蹄疫的防控策略及其空衣壳疫苗的研究进展 | 第15-19页 |
2. 杆状病毒-昆虫细胞表达系统概述 | 第19-23页 |
·昆虫杆状病毒载体 | 第20-21页 |
·昆虫细胞系 | 第21页 |
·BEVS 应用概述 | 第21页 |
·BEVS 在 VLPs 疫苗研发中的应用 | 第21-23页 |
第一部分 重组 pFastBac1-P12A3C 载体和重组病毒载体 rBacmid 的构建 | 第23-44页 |
1. 材料 | 第23-28页 |
·实验材料 | 第23页 |
·主要仪器设备 | 第23-25页 |
·主要试剂 | 第25-27页 |
·主要试剂的配制 | 第27-28页 |
2. 实验方法及实验步骤 | 第28-37页 |
·技术路线 | 第28-29页 |
·引物设计 | 第29页 |
·获得目的基因 P12A3C | 第29-33页 |
·构建重组质粒 pFastBac1-P12A3C | 第33-34页 |
·突变克隆的定点回复突变 | 第34-35页 |
·获得重组杆状病毒载体 rBacmid | 第35-37页 |
3. 实验结果 | 第37-42页 |
·P12A 和 3C 基因的 PCR 扩增 | 第37-38页 |
·获得串联的 P12A3C 基因 | 第38-39页 |
·重组载体 pFastBac1-P12A3C 的构建 | 第39-40页 |
·测序结果 | 第40-41页 |
·定点回复突变结果 | 第41-42页 |
·获得重组病毒载体 rBacmid | 第42页 |
4. 分析与讨论 | 第42-44页 |
第二部分 FMDV 空衣壳在 Sf9 昆虫细胞系中表达及其检测 | 第44-62页 |
1. 材料 | 第44-46页 |
·实验材料 | 第44页 |
·主要仪器设备 | 第44页 |
·主要试剂 | 第44页 |
·主要试剂配制 | 第44-46页 |
2. 实验方法及实验步骤 | 第46-53页 |
·技术路线 | 第46页 |
·实验方法及实验步骤 | 第46-53页 |
3. 实验结果 | 第53-58页 |
·细胞形态学检测 | 第53-54页 |
·DNA 水平检测 | 第54页 |
·mRNA 水平检测 | 第54-55页 |
·蛋白质水平检测 | 第55-57页 |
·FMDV 病毒样粒子形态学检测 | 第57-58页 |
·病毒原液的滴度 | 第58页 |
4. 分析与讨论 | 第58-62页 |
第三部分 FMDV 空衣壳的大量制备及免疫动物实验 | 第62-69页 |
1. 材料 | 第62-63页 |
·实验材料 | 第62页 |
·主要仪器设备 | 第62页 |
·主要试剂 | 第62页 |
·主要溶液的配制 | 第62-63页 |
2. 实验方法及实验步骤 | 第63-66页 |
·大量培养细胞并接毒 | 第63页 |
·浓缩 FMDV 空衣壳 | 第63-64页 |
·对浓缩的空衣壳进行检测 | 第64页 |
·免疫豚鼠实验 | 第64-65页 |
·间接 ELISA 检测 | 第65-66页 |
3. 实验结果 | 第66-68页 |
·Western Blot 检测 | 第66页 |
·SDS-PAGE 检测 | 第66-67页 |
·浓缩蛋白浓度 | 第67页 |
·ELISA 结果 | 第67-68页 |
4. 分析与讨论 | 第68-69页 |
第四部分 结论 | 第69-70页 |
参考文献 | 第70-74页 |
致谢 | 第74-75页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第75页 |