| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-21页 |
| 第一章 人乳头瘤病毒预防性疫苗研究 | 第21-99页 |
| 第一节 前言 | 第21-39页 |
| ·、人乳头瘤病毒研究概述 | 第21-29页 |
| ·HPV 分类与型别 | 第21-25页 |
| ·HPV 的感染机制及致病机理 | 第25-26页 |
| ·HPV 的流行病学 | 第26-29页 |
| ·人乳头瘤病毒及其相关疫苗研究 | 第29-33页 |
| ·人乳头瘤病毒与人类癌症 | 第29页 |
| ·HPV 疫苗研究进展 | 第29-31页 |
| ·治疗型 HPV 疫苗 | 第31页 |
| ·预防型 HPV 疫苗 | 第31-33页 |
| ·HPV 疫苗表达策略 | 第33-38页 |
| ·表达系统选择 | 第33页 |
| ·昆虫细胞-杆状病毒表达系统在疫苗中的应用 | 第33-36页 |
| ·Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统 | 第36-38页 |
| ·本论文的设计思想 | 第38-39页 |
| 第二节 HPV 各亚型 L1 表达及 VLP 纯化 | 第39-52页 |
| ·材料 | 第39-42页 |
| ·质粒、菌株、细胞株 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·仪器 | 第40-41页 |
| ·溶液配制 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·PCR 获得各亚型 L1 序列 | 第42页 |
| ·构建各亚型 L1 蛋白 pFastBacTM1 转移载体 | 第42页 |
| ·构建 Bacmid-HPVL1 穿梭质粒 | 第42页 |
| ·杆粒转染 sf9 昆虫细胞 | 第42-43页 |
| ·杆状病毒扩增及滴度的测定 | 第43页 |
| ·昆虫细胞培养 | 第43-44页 |
| ·HPV 各亚型 VLP 在 Sf9 细胞中的表达 | 第44页 |
| ·超速离心纯化 HPV 各亚型 VLP | 第44页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第44-45页 |
| ·Western-Blot | 第45页 |
| ·透射电镜实验 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-51页 |
| ·各亚型 L1 序列的扩增与构建杆状病毒转移载体 | 第45-46页 |
| ·各亚型 HPVL1-Bacmid 鉴定 | 第46-47页 |
| ·各亚型 HPVL1 杆状病毒转染及扩增 | 第47-48页 |
| ·各亚型 HPVL1 蛋白表达及 Western 检定 | 第48-49页 |
| ·电镜实验 | 第49-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第三节 HPV 多价 VLP 免疫原性研究 | 第52-67页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·质粒、菌株及细胞系 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·仪器与设备 | 第52-53页 |
| ·溶液配制 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·质粒转染 | 第53页 |
| ·质粒提取 | 第53-54页 |
| ·细胞复苏 | 第54页 |
| ·细胞培养及转染 | 第54页 |
| ·各型假病毒收获 | 第54页 |
| ·超速离心纯化各型假病毒 | 第54-55页 |
| ·各型假病毒病毒滴度测定 | 第55页 |
| ·HPV 多亚型疫苗小鼠免疫实验 | 第55页 |
| ·血清中和抗体检测 | 第55-56页 |
| ·各型假病毒接种量的选择 | 第56页 |
| ·结果和讨论 | 第56-66页 |
| ·假病毒中和抗体系统中报告基因的选择 | 第56-58页 |
| ·各型假病毒制备及其滴度测定 | 第58-59页 |
| ·假病毒接种量的选择 | 第59页 |
| ·HPV16 全长型与截短型中和抗体滴度对比 | 第59-60页 |
| ·HPV 单价疫苗假病毒中和抗体研究 | 第60-63页 |
| ·HPV 多价疫苗假病毒中和抗体研究 | 第63-65页 |
| ·各型疫苗型特异抗体对比 | 第65-66页 |
| 小结 | 第66-67页 |
| 第四节 HPV6L1VLP 生产工艺研究 | 第67-99页 |
| ·材料 | 第67-68页 |
| ·细胞系 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·仪器 | 第67-68页 |
| ·溶液配制 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-76页 |
| ·HPV6L1 杆状病毒感染参数优化 | 第68-69页 |
| ·生物反应器培养 sf9 昆虫细胞 | 第69页 |
| ·不同方法破碎昆虫细胞对比 | 第69-70页 |
| ·中空纤维超滤柱纯化研究 | 第70页 |
| ·不同层析介质纯化 HPV6 L1 | 第70-71页 |
| ·SF9 细胞宿主 DNA 残留量操作方法 | 第71-74页 |
| ·SF9 昆虫细胞宿主蛋白残留量检测方法 | 第74-75页 |
| ·ELISA 法测定 HPV VLP 疫苗抗原含量 | 第75页 |
| ·细菌内毒素 | 第75-76页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第76页 |
| ·蛋白浓度检测 | 第76页 |
| ·结果和讨论 | 第76-97页 |
| ·HPV6L1 杆状病毒感染参数优化 | 第76-77页 |
| ·不同原理生物反应器培养 sf9 昆虫细胞对比 | 第77-78页 |
| ·应用 WAVE 反应器培养 sf9 昆虫细胞 | 第78-80页 |
| ·不同方法破碎昆虫细胞对比 | 第80-81页 |
| ·中空纤维超滤柱下游纯化研究 | 第81-84页 |
| ·HPV6L1 初步分离纯化阶段工艺摸索 | 第84-88页 |
| ·HPV 6L1 精制分离纯化阶段工艺摸索 | 第88-93页 |
| ·VLP 体外组装实验 | 第93-94页 |
| ·SF9 昆虫细胞宿主 DNA 残留量检测方法 | 第94-95页 |
| ·SF9 昆虫细胞宿主蛋白残留量检测方法 | 第95-96页 |
| ·ELISA 法测定 HPV VLP 疫苗抗原含量 | 第96页 |
| ·细菌内毒素含量检测 | 第96页 |
| ·蛋白质浓度检测 | 第96-97页 |
| 小结 | 第97-99页 |
| 第二章 填充床生物反应器表达流感病毒的研究 | 第99-125页 |
| 1．前言 | 第99-110页 |
| ·流感病毒简介 | 第99-100页 |
| ·流感病毒结构 | 第99-100页 |
| ·流感病毒分类及抗原多变性 | 第100页 |
| ·流感疫苗研究概况 | 第100-104页 |
| ·流感疫苗研究历史 | 第100-101页 |
| ·灭活流感疫苗 | 第101-103页 |
| ·研制中的新型流感疫苗 | 第103-104页 |
| ·动物细胞培养流感疫苗研究 | 第104-106页 |
| ·动物细胞培养流感疫苗 | 第104-105页 |
| ·生产流感病毒疫苗常用细胞系 | 第105-106页 |
| ·大规模培养动物细胞技术 | 第106-109页 |
| ·大规模培养动物细胞概述 | 第106-108页 |
| ·常用的生物反应器 | 第108-109页 |
| ·本论文的设计思想 | 第109-110页 |
| 2.材料与方法 | 第110-114页 |
| ·材料 | 第110-111页 |
| ·细胞系与毒株 | 第110页 |
| ·主要试剂 | 第110页 |
| ·仪器 | 第110-111页 |
| ·主要试剂 | 第111页 |
| ·实验方法 | 第111-114页 |
| ·MDCK 细胞复苏及培养 | 第111页 |
| ·H1N1 流感病毒在 MDCK 细胞上的传代适应 | 第111页 |
| ·流感病毒的 TCID_(50)测定 | 第111页 |
| ·病毒血凝滴度测定 | 第111-112页 |
| ·结晶紫细胞计数 | 第112页 |
| ·微型反应器培养 MDCK 细胞 | 第112页 |
| ·微型反应器感染参数优化 | 第112-113页 |
| ·AP20C 生物反应器培养 MDCK 细胞及流感病毒表达 | 第113-114页 |
| 3.结果与讨论 | 第114-123页 |
| ·H1N1 流感病毒在 MDCK 细胞上的传代适应 | 第114页 |
| ·种子链扩增 | 第114-115页 |
| ·微型反应器培养 MDCK 细胞 | 第115-116页 |
| ·微型反应器感染参数优化 | 第116-118页 |
| ·生物反应器培养 MDCK 细胞 | 第118-123页 |
| 小结 | 第123-125页 |
| 结论 | 第125-127页 |
| 参考文献 | 第127-147页 |
| 作者简历 | 第147-148页 |
| 致谢 | 第148页 |
