| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| ·卤醇脱卤酶简介 | 第10-13页 |
| ·提高外源基因表达的途径 | 第13-17页 |
| ·高通量筛选方法 | 第17-18页 |
| ·酶的体外改造 | 第18-19页 |
| ·论文研究内容 | 第19-21页 |
| ·卤醇脱卤酶 HheA 表达优化和纯化 | 第19页 |
| ·卤醇脱卤酶催化环氧化物开环反应筛选方法的建立 | 第19-20页 |
| ·卤醇脱卤酶 HheA 定向进化 | 第20-21页 |
| 第二章 卤醇脱卤酶 HheA 的表达优化 | 第21-35页 |
| ·实验材料和方法 | 第21-26页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·重组表达质粒 pET-30aHheA 的构建 | 第22页 |
| ·N 端碱基突变与分析 | 第22-23页 |
| ·文库筛选 | 第23页 |
| ·mRNA 二级结构分析 | 第23页 |
| ·卤醇脱卤酶 HheA 及其突变体的表达纯化 | 第23-25页 |
| ·稳态动力学常数测量 | 第25-26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-33页 |
| ·卤醇脱卤酶 HheA 在 T7 启动子载体中的表达情况 | 第26-27页 |
| ·改造 HheA 的 N 末端以提高表达水平 | 第27-29页 |
| ·通过+2 位点 HHH 随机突变来调节 HheA 的表达水平 | 第29-31页 |
| ·mRNA 二级结构预测 | 第31-32页 |
| ·野生型和突变体 HheA 的表达纯化及生化特性的鉴定 | 第32-33页 |
| ·结论 | 第33-35页 |
| 第三章 高通量筛选方法的建立 | 第35-44页 |
| ·实验材料和方法 | 第35-37页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·卤醇脱卤酶的诱导表达 | 第35页 |
| ·高碘酸钠和肾上腺素比例的确定 | 第35-36页 |
| ·反应时间的确定 | 第36页 |
| ·高碘酸钠浓度确定 | 第36页 |
| ·气相检测 | 第36-37页 |
| ·文库筛选 | 第37页 |
| ·结果和讨论 | 第37-43页 |
| ·实验条件的优化 | 第37-41页 |
| ·不同亲核试剂介导下的开环反应 | 第41-42页 |
| ·开环方法应用于文库筛选 | 第42-43页 |
| ·结论 | 第43-44页 |
| 第四章 卤醇脱卤酶 HheA 定向进化 | 第44-50页 |
| ·实验材料和方法 | 第44-46页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·高表达 HheA 基因的改造 | 第44-45页 |
| ·随机突变文库的构建 | 第45页 |
| ·突变文库的筛选 | 第45页 |
| ·DNA 重组突变文库的构建 | 第45-46页 |
| ·结果和讨论 | 第46-49页 |
| ·高表达 pBADHheA 突变体构建 | 第46-47页 |
| ·突变文库的构建和筛选 | 第47-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 攻硕期间取得的研究成果 | 第58-59页 |
