| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| ·链霉菌研究史 | 第11页 |
| ·大环内酯类抗生素 | 第11-12页 |
| ·Borrelidin | 第12-17页 |
| ·Borrelidin的生物合成 | 第12-13页 |
| ·Borrelidin基因簇 | 第13-14页 |
| ·Borrelidin与ThrRS的抑制 | 第14-16页 |
| ·Borrelidin的抗菌活性 | 第16-17页 |
| ·Borrelidin的抗癌活性 | 第17页 |
| ·马铃薯晚疫危害 | 第17-18页 |
| ·农药风险 | 第18-19页 |
| ·农药对人健康的风险 | 第18-19页 |
| ·农药对环境的风险 | 第19页 |
| ·研究目的与实验内容 | 第19-21页 |
| ·研究目的和意义 | 第19-20页 |
| ·课题来源和研究内容 | 第20-21页 |
| 2 实验材料与仪器 | 第21-25页 |
| ·菌种与质粒 | 第21页 |
| ·材料与生化试剂 | 第21页 |
| ·Borrelidin对马铃薯晚疫IC_(50)测定材料 | 第21页 |
| ·试剂及酶类 | 第21页 |
| ·培养基及溶液 | 第21-24页 |
| ·仪器与厂家 | 第24-25页 |
| 3 实验方法 | 第25-35页 |
| ·Borrelidin对马铃薯疫霉IC_(50)测定 | 第25页 |
| ·马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶的基因克隆与序列分析 | 第25-29页 |
| ·马铃薯晚疫菌总DNA提取方法 | 第25页 |
| ·马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶基因引物的设计及合成 | 第25-26页 |
| ·PCR克隆马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶基因 | 第26页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第26-27页 |
| ·DH5α感受态细胞制备 | 第27页 |
| ·目的基因与克隆载体的连接及转化 | 第27-28页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第28-29页 |
| ·目的基因的核苷酸序列测定 | 第29页 |
| ·马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶在大肠杆菌中的表达纯化 | 第29-33页 |
| ·双酶切质粒pET-32a(+)和阳性重组质粒的PCR产物 | 第29页 |
| ·马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶基因与表达载体的连接与转化 | 第29-30页 |
| ·阳性重组质粒的筛选与鉴定 | 第30-31页 |
| ·阳性重组子转化表达宿主菌及鉴定 | 第31页 |
| ·重组pET-32a(+)-ThrRS在大肠杆菌中的诱导表达 | 第31页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第31-32页 |
| ·马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·Borrelidin对马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶的活性测定 | 第33-35页 |
| ·马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶对苏氨酸的作用 | 第33页 |
| ·Borrelidin对马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶的抑制 | 第33-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-46页 |
| ·Borrelidin对马铃薯晚疫的作用 | 第35-36页 |
| ·苏氨酸对borrelidin抑制马铃薯晚疫的缓解作用 | 第36页 |
| ·马铃薯晚疫苏氨酰tRNA合成酶基因的克隆 | 第36-41页 |
| ·马铃薯晚疫总DNA的提取检测 | 第36-37页 |
| ·马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶序列克隆及分析 | 第37-41页 |
| ·马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶基因的原核表达载体构建 | 第41-43页 |
| ·表达载体构建所需的马铃薯苏氨酰-tRNA合成酶基因的获取 | 第41页 |
| ·pET-32a和目标DNA的双酶切及连接 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌表达的重组质粒鉴定 | 第42-43页 |
| ·马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶蛋白的表达纯化 | 第43-44页 |
| ·马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶蛋白的SDS-PAGE检测 | 第43页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第43-44页 |
| ·蛋白样品透析 | 第44页 |
| ·Borrelidin对马铃薯晚疫苏氨酰-tRNA合成酶的体外作用 | 第44-46页 |
| 5 讨论 | 第46-48页 |
| ·Borrelidin与苏氨酰-tRNA合成酶的作用位点 | 第46页 |
| ·苏氨酰-tRNA合成酶的原核表达 | 第46-48页 |
| 6 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第54页 |
