| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| ·蚊虫危害、防治和杀虫剂抗性的概述 | 第13-15页 |
| ·昆虫抗药性机理 | 第15-18页 |
| ·代谢抗性 | 第15-16页 |
| ·靶标抗性 | 第16-18页 |
| ·差异表达基因的克隆与分析技术 | 第18-23页 |
| ·差异表达基因的传统克隆技术 | 第18-19页 |
| ·表达序列标签（Expressed sequence tag, EST） | 第19页 |
| ·cDNA 阵列杂交技术(Hybridization analysis of arrayed cDNA library) | 第19页 |
| ·抑制性差减杂交(Suppression subtractive hybridization, SSH) | 第19-20页 |
| ·cDNA 末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends,RACE) | 第20-23页 |
| ·Real-Time 实时定量PCR (real-time fluoro-genetic quantitative PCR) | 第23页 |
| ·蚊虫细胞的培养与筛选 | 第23-26页 |
| ·蚊虫细胞的培养 | 第23-24页 |
| ·半数致死浓度的测定 | 第24-25页 |
| ·耐药性细胞株的建立 | 第25-26页 |
| ·淡色库蚊杀虫剂抗性相关基因研究现状 | 第26-28页 |
| ·Para-型钠离子通道基因的研究 | 第26页 |
| ·跨膜蛋白基因的研究 | 第26-27页 |
| ·细胞色素P450 家族的研究 | 第27页 |
| ·乙酰胆碱酯酶基因的研究 | 第27页 |
| ·蚊核糖体蛋白基因的研究 | 第27页 |
| ·丝氨酸蛋白酶家族的研究 | 第27-28页 |
| ·研究内容和意义 | 第28-29页 |
| 第二章 从淡色库蚊中提取总RNA 五种不同方法的比较 | 第29-38页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·供试蚊虫 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·仪器及耗材 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-33页 |
| ·RNA 提取前的准备及处理工作 | 第30页 |
| ·总RNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·RNA 核酸浓度检测与电泳检测 | 第31页 |
| ·总RNA 的纯化 | 第31页 |
| ·反转录反应及检测 | 第31-32页 |
| ·实时荧光定量（标准曲线法绝对定量） | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-36页 |
| ·五种方法获得总RNA 质量、产量比较 | 第33页 |
| ·五种方法获得总RNA 电泳检测结果 | 第33-34页 |
| ·五种总RNA 提取方法的耗时比较 | 第34页 |
| ·总RNA 的纯化结果 | 第34页 |
| ·cDNA 第一链合成后的质量检测 | 第34页 |
| ·RT—PCR 产物的电泳结果分析 | 第34-35页 |
| ·五种方法获得的总RNA 的实时定量比较 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 基因PR-XP1 全长cDNA 克隆与生物信息学分析，及其在抗性和敏感型库蚊中的表达差异分析 | 第38-55页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·实验蚊虫 | 第39页 |
| ·主要的酶与试剂 | 第39页 |
| ·仪器设备 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·淡色库蚊抗性与敏感型蚊虫的总RNA 提取 | 第39页 |
| ·cDNA 第一链的合成（非RACE 型） | 第39页 |
| ·cDNA 第一链的合成（SMART-RACE 型） | 第39-40页 |
| ·淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因的3＇、5＇RACE 扩增 | 第40页 |
| ·RACE 产物的回收与测序 | 第40-41页 |
| ·全长cDNA 的扩增 | 第41-42页 |
| ·生物信息学分析 | 第42页 |
| ·RP-XP1 基因的荧光定量引物的设计与检测 | 第42页 |
| ·荧光定量 PCR 对 RP-XP1 基因在抗性与敏感型淡色库蚊中表达差异的监测 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-53页 |
| ·抗性与敏感型淡色库蚊的总RNA 提取 | 第43-44页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第44页 |
| ·淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因PR-XP1 的克隆 | 第44页 |
| ·PR-XP1 基因的全长序列及编码氨基酸序列分析 | 第44-46页 |
| ·PR-XP1 基因的生物信息学分析 | 第46-51页 |
| ·β-ACTIN 和PR-XP1 基因的扩增 | 第51页 |
| ·抗性品系与敏感品系蚊中PR-XP1 基因的表达 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 C6/36 氯菊酯耐药细胞株的建立以及 PR-XP1 基因在 C6/36 耐药与普通细胞株中表达水平的研究 | 第55-67页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·细胞株 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·仪器及耗材 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-59页 |
| ·C6/36 细胞的传代培养 | 第56页 |
| ·C6/36 细胞的冻存与复苏 | 第56页 |
| ·氯菊酯对C6/36 细胞半数致死浓度的测定 | 第56页 |
| ·C6/36 细胞氯菊酯耐药细胞株的筛选 | 第56-57页 |
| ·C6/36 细胞生长曲线的测定 | 第57页 |
| ·C6/36 细胞总RNA 的提取 | 第57页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第57页 |
| ·半定量RT-PCR 体系的建立 | 第57-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-65页 |
| ·不同浓度氯菊酯对C6/36 细胞的杀伤作用 | 第59-60页 |
| ·氯菊酯对C6/36 细胞半数致死量的测定结果 | 第60页 |
| ·耐药细胞株筛选结果 | 第60-61页 |
| ·C6/36 细胞总RNA 提取结果 | 第61-62页 |
| ·C6/36 细胞总RNA 电泳图谱分析 | 第62页 |
| ·PR-XP1 和β-ACTIN cDNA 模板退火温度的确定 | 第62-63页 |
| ·半定量RT-PCR 循环数的确定 | 第63-64页 |
| ·PR-XP1 基因在 C6/36 耐药细胞株与正常细胞株表达差异的半定量 RT-PCR 结果 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 结论与展望 | 第67-69页 |
| ·主要结论 | 第67页 |
| ·研究展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 附录 | 第76-81页 |
| 附录1 主要溶液的配制 | 第76-77页 |
| 附录2 实时定量实验扩增曲线及溶解曲线 | 第77-79页 |
| 附录3 英文缩略词表 | 第79-80页 |
| 附录4 主要仪器设备 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简介 | 第82页 |
