| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 1 绪论 | 第12-23页 |
| ·宏基因组学概述 | 第12-17页 |
| ·引言 | 第12-13页 |
| ·宏基因组的研究方法 | 第13-15页 |
| ·宏基因组学的应用进展 | 第15-17页 |
| ·酯酶(脂肪酶)概述 | 第17-21页 |
| ·引言 | 第17-18页 |
| ·脂肪酶在药物合成中的应用 | 第18-19页 |
| ·脂肪酶在食品工业上的应用 | 第19-20页 |
| ·脂肪酶在纺织、洗涤工业中的应用 | 第20-21页 |
| ·脂肪酶在生物柴油制备上的应用 | 第21页 |
| ·课题研究背景和意义、主要内容 | 第21-23页 |
| ·研究背景和意义 | 第21-22页 |
| ·课题研究主要内容 | 第22-23页 |
| 2 宏基因组DNA文库构建 | 第23-32页 |
| ·引言 | 第23-24页 |
| ·实验材料与试剂 | 第24-26页 |
| ·菌株、质粒和噬菌体包装蛋白 | 第24页 |
| ·试剂与仪器耗材 | 第24-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·环境微生物土壤样品采集 | 第26页 |
| ·土壤样品高质量宏基因组DNA提取 | 第26-27页 |
| ·醇沉淀宏基因组DNA | 第27页 |
| ·宏基因组DNA Fosmid文库构建 | 第27-29页 |
| ·实验结果与讨论 | 第29-32页 |
| ·高质量宏基因组DNA制备 | 第29-30页 |
| ·宏基因组DNA Fosmid文库构建 | 第30-32页 |
| 3 基于宏基因组功能筛选技术筛选酯酶基因 | 第32-43页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·实验材料与试剂 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-38页 |
| ·功能筛选准备工作 | 第33页 |
| ·酯酶阳性克隆菌株的筛选 | 第33-34页 |
| ·酯酶亚克隆文库构建 | 第34-38页 |
| ·实验结果与讨论 | 第38-43页 |
| ·基于宏基因组功能筛选获取酯酶阳性克隆 | 第38-39页 |
| ·酯酶亚克隆文库构建和筛选 | 第39-40页 |
| ·基因序列分析 | 第40-43页 |
| 4 EstC23异源表达和蛋白纯化 | 第43-53页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·实验材料与试剂 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-47页 |
| ·EstC23/pET-21a/E.coil BL21(DE3)表达体系构建 | 第44-46页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第46页 |
| ·EstC23目标蛋白纯化 | 第46-47页 |
| ·实验结果与讨论 | 第47-53页 |
| ·EstC23/pET-21a/E.coli BL21(DE3)重组表达体系构建 | 第47-49页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第49-51页 |
| ·EstC23蛋白纯化 | 第51-52页 |
| ·蛋白冻干 | 第52-53页 |
| 5 酯酶EstC23蛋白酶学性质表征 | 第53-66页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料与试剂 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-58页 |
| ·EstC23蛋白浓度测定 | 第54-55页 |
| ·EstC23酯酶底物特异性测定 | 第55页 |
| ·温度对EstC23酶活性影响 | 第55-56页 |
| ·pH对EstC23的酶活性影响 | 第56-57页 |
| ·EstC23耐有机溶剂稳定性的测定 | 第57页 |
| ·EstC23对叔醇酯底物水解的测定 | 第57页 |
| ·酯酶EstC23催化合成蔗糖-6-乙酸酯 | 第57-58页 |
| ·实验结果与讨论 | 第58-66页 |
| ·酯酶EstC23蛋白浓度的测定 | 第58页 |
| ·EstC23酯酶底物特异性测定 | 第58-60页 |
| ·pH对EstC23酶活性和稳定性的影响 | 第60-62页 |
| ·温度对EstC23酶活性和稳定性的影响 | 第62页 |
| ·有机溶剂对EstC23稳定性的影响 | 第62-64页 |
| ·EstC23催化合成蔗糖-6-乙酸酯 | 第64-66页 |
| 6 宏基因组特异性PCR钓取酯酶EstC23同源家族基因 | 第66-72页 |
| ·引言 | 第66页 |
| ·实验材料与试剂 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-69页 |
| ·EstC23氨基酸序列比对和引物设计 | 第66-67页 |
| ·PCR技术钓取宏基因组来源的EstC23家族同源基因 | 第67-68页 |
| ·基于PCR钓取宏基因组来源的目的片段的回收与鉴定 | 第68-69页 |
| ·实验结果与讨论 | 第69-72页 |
| ·EstC23氨基酸序列比对和保守区段特异性引物设计 | 第69页 |
| ·PCR扩增宏基因组样品结果 | 第69-71页 |
| ·宏基因组特异性PCR扩增的酯酶序列分析 | 第71-72页 |
| 7 结论与展望 | 第72-74页 |
| ·总结 | 第72页 |
| ·创新和意义 | 第72-73页 |
| ·展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 附录1 EstC23信息 | 第82-84页 |
| 附录2 作者简介 | 第84-85页 |
