| 中文摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-18页 |
| 1 引言 | 第18-43页 |
| ·禽流感研究进展 | 第18-27页 |
| ·流感病毒病原 | 第18-20页 |
| ·禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶与病毒致病性关系 | 第20-23页 |
| ·禽流感的流行病学 | 第23-25页 |
| ·禽流感的传播方式 | 第25-27页 |
| ·病毒气溶胶 | 第27-36页 |
| ·概念 | 第27-28页 |
| ·病毒气溶胶的特性 | 第28-29页 |
| ·病毒气溶胶的发生 | 第29-30页 |
| ·病毒气溶胶的传播感染 | 第30-31页 |
| ·病毒气溶胶采样 | 第31-34页 |
| ·病毒气溶胶的检测 | 第34-36页 |
| ·流感病毒反向遗传操作技术 | 第36-41页 |
| ·流感病毒反向遗传技术发展史 | 第36-38页 |
| ·反向遗传技术在流感病毒传染方面的研究 | 第38-41页 |
| ·研究的目的意义 | 第41-43页 |
| 2 材料与方法 | 第43-70页 |
| ·材料 | 第43-46页 |
| ·病毒株 | 第43页 |
| ·实验动物、细胞及生物试剂 | 第43页 |
| ·质粒病毒拯救系统 | 第43页 |
| ·主要分子生物学试剂及试剂盒 | 第43-44页 |
| ·主要实验溶液的配置 | 第44-45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-70页 |
| ·气载 H9 亚型 AIV real-time RT-PCR 方法的建立及应用 | 第46-53页 |
| ·引物和探针设计 | 第46页 |
| ·RNA 的提取 | 第46-47页 |
| ·cDNA 的合成 | 第47-48页 |
| ·荧光定量 PCR 反应条件 | 第48页 |
| ·质粒标准品的制备 | 第48-51页 |
| ·荧光定量 PCR 特异性鉴定 | 第51页 |
| ·灵敏性和重复性试验 | 第51页 |
| ·鸡舍样品采集及检测 | 第51-53页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第53页 |
| ·荧光定量 PCR 和 RT-PCR 灵敏性的比较 | 第53页 |
| ·H9N2 AIV 山东分离株 HA 和 NA 基因序列分析及致病性研究 | 第53-57页 |
| ·病毒的分离及初步鉴定 | 第53-54页 |
| ·引物设计 | 第54页 |
| ·RNA 提取 | 第54页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第54页 |
| ·DNA 片段与 T 载体连接 | 第54-55页 |
| ·连接产物的转化及克隆鉴定 | 第55页 |
| ·序列分析 | 第55页 |
| ·毒株的致病性 | 第55-56页 |
| ·毒株在豚鼠间传播试验 | 第56-57页 |
| ·病毒气溶胶的感染剂量 | 第57页 |
| ·H9N2 亚型 AIV SD01 株全基因克隆测序分析 | 第57-59页 |
| ·引物设计 | 第57页 |
| ·RNA 提取 | 第57页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第57-58页 |
| ·克隆质粒的构建及鉴定 | 第58页 |
| ·序列分析 | 第58-59页 |
| ·H9N2 AIV NA 蛋白氨基酸位点的突变对其传播能力的影响 | 第59-70页 |
| ·引物设计 | 第59页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第59页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第59页 |
| ·H9N2 AIV 基因转录/表达载体的构建 | 第59-62页 |
| ·基因定点突变引物和程序设计 | 第62页 |
| ·基因突变 | 第62-64页 |
| ·转染质粒的准备 | 第64-65页 |
| ·病毒的拯救 | 第65-66页 |
| ·拯救病毒的鉴定 | 第66页 |
| ·H9N2 AIV 在鸡胚内的复制能力及 EID50的测定 | 第66页 |
| ·H9N2AIV 在 SPF 鸡肺组织内的复制 | 第66页 |
| ·H9N2 AIV 神经氨酸酶活性的测定 | 第66-67页 |
| ·H9N2 AIV 重组株的抗原性 | 第67页 |
| ·H9N2 AIV 在 SPF 鸡群间传播途径试验 | 第67-69页 |
| ·数据的统计分析 | 第69-70页 |
| 3 结果 | 第70-89页 |
| ·气载 H9 亚型 AIV real-time RT-PCR 方法的建立及应用 | 第70-73页 |
| ·荧光定量 PCR 特异性 | 第70页 |
| ·荧光定量 PCR 标准曲线及敏感性测定 | 第70-71页 |
| ·标准曲线 | 第70-71页 |
| ·灵敏度与 RT-PCR 的比较 | 第71页 |
| ·荧光定量 PCR 重复性 | 第71-72页 |
| ·鸡舍中 H9 AIV 的 real-time RT-PCR 和 RT-PCR 检测 | 第72-73页 |
| ·山东分离株 H9N2 亚型禽流感病毒序列测定及致病性检测 | 第73-79页 |
| ·毒株序列分析结果 | 第73-77页 |
| ·分离株对动物的致病性 | 第77页 |
| ·H9N2 AIV 在豚鼠间的传染 | 第77-78页 |
| ·病毒气溶胶感染剂量测定 | 第78-79页 |
| ·SD01 株全基因序列分析结果 | 第79-83页 |
| ·8 基因片段 PCR 扩增及测序结果 | 第79-80页 |
| ·基因核苷酸一致性比较 | 第80页 |
| ·基因系统发育树分析 | 第80-82页 |
| ·关键氨基酸位点分析 | 第82-83页 |
| ·H9N2 AIVNA 蛋白氨基酸位点的突变对其传播能力的影响 | 第83-89页 |
| ·反向遗传转录/表达载体的构建 | 第83页 |
| ·H9N2 AIV 重组株和 NA 基因突变株的拯救 | 第83-84页 |
| ·H9N2 AIV 在鸡胚内的复制能力及 EID50 | 第84-85页 |
| ·H9N2 毒株在 SPF 鸡肺组织内的复制 | 第85-86页 |
| ·H9N2AIV 神经氨酸酶活力 | 第86页 |
| ·H9N2 AIV 突变株抗原性的变化 | 第86-87页 |
| ·H9N2 AIV 突变株在 SPF 鸡群间的传染方式 | 第87-89页 |
| ·SPF 鸡排毒检测 | 第87-88页 |
| ·SPF 鸡 AIV 抗体水平检测 | 第88页 |
| ·隔离器中气载 H9N2 AIV 的检测 | 第88-89页 |
| 4 讨论 | 第89-96页 |
| ·气载 H9 亚型 AIV real-time RT-PCR 方法的建立及应用 | 第89-90页 |
| ·H9N2 AIV 基因序列分析及在哺乳动物间的传染 | 第90-93页 |
| ·病毒基因分析 | 第90-92页 |
| ·病毒在哺乳动物间的传播感染 | 第92-93页 |
| ·神经氨酸酶氨基酸位点的突变对病毒传播方式的影响 | 第93-96页 |
| 5 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-113页 |
| 附录 | 第113-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 博士在读期间发表论文 | 第128页 |
