| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-21页 |
| ·蛋白酶概述 | 第10-11页 |
| ·丝氨酸蛋白酶 | 第11-13页 |
| ·溶藻细菌与溶藻酶 | 第13-17页 |
| ·溶藻细菌 | 第13-15页 |
| ·溶藻机理 | 第15-17页 |
| ·溶藻酶的应用 | 第17页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第17-21页 |
| 第二章 Pseudoalteromonas sp.CF4-3产的蛋白酶的分离纯化和基因克隆 | 第21-37页 |
| ·材料与方法 | 第21-28页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·菌株 | 第21页 |
| ·药品与试剂 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-28页 |
| ·蛋白酶酶活测定方法 | 第22-23页 |
| ·粗酶液制备 | 第23页 |
| ·阴离子交换层析 | 第23页 |
| ·SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第23页 |
| ·聚丙烯酰胺明胶活性电泳 | 第23-24页 |
| ·N-端测序 | 第24页 |
| ·MALDI-TOF质谱测定CF43的分子量 | 第24页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·丝氨酸蛋白酶CF43基因的克隆与测序 | 第25-28页 |
| ·结果分析 | 第28-35页 |
| ·培养时间对P.sp.CF4-3产蛋白酶的影响 | 第28-29页 |
| ·P.sp.CF4-3所产蛋白酶的分离纯化 | 第29-30页 |
| ·蛋白酶CF43的N端测序 | 第30-31页 |
| ·CF43基因的克隆及序列分析 | 第31-35页 |
| ·基因克隆和测序 | 第31-35页 |
| ·序列分析 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 丝氨酸蛋白酶CF43的重组表达及性质研究 | 第37-52页 |
| ·材料与方法 | 第37-43页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·主要药品和试剂 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-43页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第38页 |
| ·表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·诱导表达 | 第40页 |
| ·重组丝氨酸蛋白酶CF43的分离纯化 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第40页 |
| ·底物特异性实验 | 第40-41页 |
| ·最适反应pH测定 | 第41页 |
| ·pH稳定性测定 | 第41-42页 |
| ·最适反应温度测定 | 第42页 |
| ·热稳定性测定 | 第42页 |
| ·金属离子和抑制剂对酶活的影响的测定 | 第42页 |
| ·对NaCl耐受性实验 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-51页 |
| ·CF43重组表达和纯化 | 第43-44页 |
| ·CF43的底物特异性 | 第44-46页 |
| ·CF43的最适反应pH和pH稳定性 | 第46-47页 |
| ·CF43的最适反应温度和热稳定性 | 第47-48页 |
| ·抑制剂和金属离子对酶活的影响 | 第48-50页 |
| ·CF43对NaCl的耐受性 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 CF43的溶藻活性研究 | 第52-60页 |
| ·材料与方法 | 第52-54页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·藻株 | 第52页 |
| · | 第52-53页 |
| ·主要药品和试剂 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-54页 |
| ·对螺旋藻的溶藻活性实验 | 第53-54页 |
| ·对水华鱼腥藻的溶藻活性实验 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-58页 |
| ·CF43对螺旋藻的溶藻活性 | 第54-57页 |
| ·CF43处理对螺旋藻荧光光谱的影响 | 第54-55页 |
| ·显微镜观察CF43处理螺旋藻引起的形态变化 | 第55-56页 |
| ·CF43处理的螺旋藻的培养 | 第56-57页 |
| ·CF43处理水华鱼腥藻引起的形态变化 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 在读硕士期间发表的论文 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69页 |