| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第18-30页 |
| 1.1 脂肪酶 | 第18-20页 |
| 1.1.1 脂肪酶简介 | 第18页 |
| 1.1.2 脂肪酶来源 | 第18页 |
| 1.1.3 脂肪酶的应用 | 第18-20页 |
| 1.2 洋葱伯克霍尔德氏菌脂肪酶 | 第20-21页 |
| 1.2.1 洋葱伯克霍尔德氏菌脂肪酶简介 | 第20页 |
| 1.2.2 洋葱伯克霍尔德氏菌脂肪酶研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3 手性药物 | 第21-23页 |
| 1.3.1 手性药物简介 | 第21-22页 |
| 1.3.2 手性药物获取途径 | 第22-23页 |
| 1.4 硫酸沃拉帕沙 | 第23-27页 |
| 1.4.1 硫酸沃拉帕沙简介 | 第23-24页 |
| 1.4.2 前人的研究成果 | 第24-27页 |
| 1.5 课题的研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 1.6 本课题主要研究内容 | 第28-30页 |
| 第二章 硫酸沃拉帕沙药物中间体的合成及检测条件的确定 | 第30-38页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 实验试剂和仪器 | 第30页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第30页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-33页 |
| 2.3.1 4-羟基-N,N-二苯基-2-戊炔酰胺的合成 | 第30-32页 |
| 2.3.2 4-乙酰氧基-N,N-二苯基-2-戊炔酰胺合成 | 第32-33页 |
| 2.3.3 底物检测条件的确定 | 第33页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第33-36页 |
| 2.4.1 化合物1的合成 | 第33页 |
| 2.4.2 化合物2的合成 | 第33-34页 |
| 2.4.3 (RS)-A的合成 | 第34-35页 |
| 2.4.4 (RS)-B的合成 | 第35页 |
| 2.4.5 底物检测条件的确定 | 第35-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-38页 |
| 第三章 野生菌株及脂肪酶对底物的拆分活性检测 | 第38-46页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验试剂和仪器 | 第38-40页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第38页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第38-39页 |
| 3.2.3 培养基 | 第39页 |
| 3.2.4 溶液及缓冲液 | 第39-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.3.1 发酵获得脂肪酶CALB | 第40-41页 |
| 3.3.2 诱导表达纯化BCLA与折叠酶BCLB | 第41页 |
| 3.3.3 测定目的蛋白含量 | 第41页 |
| 3.3.4 转酯反应 | 第41-42页 |
| 3.3.5 水解反应 | 第42页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第42-45页 |
| 3.4.1 发酵获得CALB蛋白 | 第42-43页 |
| 3.4.2 BCLA和BCLB纯化 | 第43页 |
| 3.4.3 测目的蛋白含量 | 第43-44页 |
| 3.4.4 转酯反应 | 第44页 |
| 3.4.5 水解反应 | 第44-45页 |
| 3.5 本章小结 | 第45-46页 |
| 第四章 优化BCLA催化硫酸沃拉帕沙中间体拆分反应条件 | 第46-54页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 实验试剂和仪器 | 第46页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第46页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第46页 |
| 4.2.3 溶液及缓冲液 | 第46页 |
| 4.3 实验方法 | 第46-48页 |
| 4.3.1 最适温度的确定 | 第47页 |
| 4.3.2 最适pH的确定 | 第47页 |
| 4.3.3 金属离子对拆分反应的影响 | 第47-48页 |
| 4.3.4 两相反应对酶活的影响 | 第48页 |
| 4.3.5 最佳酶量与最适反应时间 | 第48页 |
| 4.3.6 最佳底物拆分效果 | 第48页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第48-53页 |
| 4.4.1 温度条件摸索 | 第48-49页 |
| 4.4.2 pH条件摸索 | 第49-50页 |
| 4.4.3 金属离子对酶活的影响 | 第50-51页 |
| 4.4.4 两相反应对酶活的影响结果 | 第51-52页 |
| 4.4.5 摸索反应酶量和反应时间 | 第52页 |
| 4.4.6 最佳底物拆分结果 | 第52-53页 |
| 4.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第五章 基因挖掘法构建基因工程菌及其底物特异性研究 | 第54-72页 |
| 5.1 引言 | 第54页 |
| 5.2 实验仪器与材料 | 第54-55页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第54-55页 |
| 5.2.2 实验材料 | 第55页 |
| 5.2.3 溶液及缓冲液 | 第55页 |
| 5.3 实验方法 | 第55-60页 |
| 5.3.1 提取洋葱伯克霍尔德氏菌基因组 | 第55页 |
| 5.3.2 BCLC基因工程菌的构建 | 第55-57页 |
| 5.3.3 基因工程菌的诱导表达、活性初检测 | 第57-58页 |
| 5.3.4 目的蛋白纯化 | 第58-59页 |
| 5.3.5 构建GST标签工程菌 | 第59页 |
| 5.3.6 GST标签基因工程菌诱导表达纯化、活性检测 | 第59-60页 |
| 5.3.7 GST标签再次纯化 | 第60页 |
| 5.3.8 BCLC作用底物特异性 | 第60页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第60-71页 |
| 5.4.1 BCLC氨基酸序列 | 第60-61页 |
| 5.4.2 提取洋葱伯克霍尔德氏菌基因组 | 第61页 |
| 5.4.3 BCLC基因工程菌的构建 | 第61-63页 |
| 5.4.4 基因工程菌的诱导表达、活性初检测 | 第63-64页 |
| 5.4.5 目的蛋白纯化 | 第64-65页 |
| 5.4.6 构建GST标签工程菌 | 第65-67页 |
| 5.4.7 GST标签基因工程菌诱导表达纯化、活性检测 | 第67-68页 |
| 5.4.8 GST标签再次纯化 | 第68页 |
| 5.4.9 BCLC作用底物特异性 | 第68-71页 |
| 5.5 本章小结 | 第71-72页 |
| 第六章 总结与展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 附录 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第88-90页 |
| 作者与导师简介 | 第90-91页 |
| 附件 | 第91-92页 |
