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农杆菌介导法将天花粉蛋白基因导入葡萄的研究

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-11页
1 前言第11-26页
 1.1 研究目的和意义第11页
 1.2 文献综述第11-26页
  1.2.1 农杆菌介导的植物遗传转化研究进展第11-15页
  1.2.2 植物抗病毒基因工程研究进展第15-19页
  1.2.3 天花粉蛋白基因的特性及应用第19-21页
  1.2.4 葡萄植株再生及遗传转化研究进展第21-26页
2 材料与方法第26-36页
 2.1 天花粉蛋白基因植物表达载体的构建第26-29页
  2.1.1 试验材料第26页
  2.1.2 试验方法第26-29页
   2.1.2.1 质粒DNA的小量提取第26-27页
   2.1.2.2 质粒的限制酶消化反应第27页
   2.1.2.3 目的片段的电泳回收第27页
   2.1.2.4 连接反应第27页
   2.1.2.5 大肠杆菌感受态的制备第27-28页
   2.1.2.6 大肠杆菌的转化第28页
   2.1.2.7 重组质粒导入农杆菌第28-29页
 2.2 葡萄植株再生体系的建立第29-31页
  2.2.1 试验材料第29-30页
  2.2.2 试验方法第30-31页
   2.2.2.1 葡萄胚性愈伤组织的诱导与继代第30页
   2.2.2.2 体细胞胚的形成及萌发第30-31页
   2.2.2.3 植株再生第31页
   2.2.2.4 驯化移栽第31页
 2.3 根癌农杆菌介导的遗传转化第31-34页
  2.3.1 试验材料第31-32页
   2.3.1.1 植物材料第31页
   2.3.1.2 菌株及质粒第31-32页
  2.3.2 试验方法第32-34页
   2.3.2.1 菌株活化第32-31页
   2.3.2.2 遗传转化程序第31-32页
   2.3.2.3 影响转化效率因素的正交试验第32-33页
   2.3.2.4 筛选试剂种类及筛选浓度的确定第33页
   2.3.2.5 液体最佳筛选时间的确定第33-34页
   2.3.2.6 植株再生第34页
 2.4 转基因植株PCR检测第34-35页
  2.4.1 试验材料第34页
  2.4.2 试验方法第34-35页
   2.4.2.1 植物总DNA提取(CTAB法)第34页
   2.4.2.2 PCR扩增第34-35页
 2.5 数据统计分析第35-36页
3 结果与分析第36-53页
 3.1 天花粉蛋白基因植物表达载体的构建第36-44页
  3.1.1 TCS基因的方向鉴定第36页
  3.1.2 中间载体的构建第36-41页
   3.1.2.1 中间载体pMTCS的构建第37-39页
   3.1.2.2 中间载体pATCS的构建第39-41页
  3.1.3 植物表达载体的构建第41-44页
   3.1.3.1 植物表达载体pBITCS的构建第41-44页
   3.1.3.2 植物表达载体pBTC的构建第44页
  3.1.4 重组质粒导入农杆菌第44页
 3.2 葡萄植株再生体系的建立第44-47页
  3.2.1 体细胞胚萌发诱导培养基的筛选第44-45页
  3.2.2 生根培养基的筛选第45-47页
   3.2.2.1 生长素对根系生长的影响第45-47页
   3.2.2.2 活性碳对防止根系褐化的影响第47页
 3.3 根癌农杆菌介导的遗传转化第47-52页
  3.3.1 影响遗传转化效率因素的探讨第47-48页
  3.3.2 液体培养基中筛选剂种类及筛选浓度的确定第48-50页
   3.3.2.1 G418筛选浓度的确定第48页
   3.3.2.2 卡那霉素(Km)筛选浓度的确立第48-49页
   3.3.2.3 新霉素(Neo)筛选浓度的确立第49-50页
  3.3.3 固体培养基中最佳筛选剂浓度的确定第50-51页
  3.3.4 液体筛选时间对阳性植株产生效率的影响第51-52页
  3.3.5 抗性植株再生第52页
 3.4 再生植株的PCR检测第52-53页
4 讨论第53-57页
5 结论第57-58页
致谢第58-59页
参考文献第59-65页
图版说明第65-66页
图版第66-70页
附录第70页

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