| 摘要 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第4-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 前言 | 第7-23页 |
| 1 抗真菌蛋白的分子生物学研究现状 | 第7-12页 |
| 2 基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性 | 第12-18页 |
| 3 PCR技术在基因改造方面的应用 | 第18-21页 |
| 4 本论文的目的意义及技术路线 | 第21-23页 |
| 材料与方法 | 第23-34页 |
| 1 材料与试剂 | 第23页 |
| 1．1 菌种和质粒 | 第23页 |
| 1．2 试剂 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-34页 |
| 2．1 质粒制备 | 第23-24页 |
| 2．2 Rs-AFP_2基因的PCR定点突变的研究 | 第24-27页 |
| 2．2．1 引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| 2．2．2 PCR反应 | 第25-26页 |
| 2．2．3 PCR产物的回收 | 第26-27页 |
| 2．2．4 PCR重叠延伸法及嵌套PCR技术 | 第27页 |
| 2．3 突变后的Rs-AFPm基因克隆载体的构建及测序 | 第27-28页 |
| 2．3．1 回收产物与T-easy载体的连接 | 第27-28页 |
| 2．3．2 E．coli XL1感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2．3．3 连接产物的转化 | 第28页 |
| 2．4 Rs-AFP_2基因及Rs-AFPm基因表达载体的构建及在E．coli中的表达 | 第28-31页 |
| 2．4．1 引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| 2．4．2 PCR反应 | 第29-30页 |
| 2．4．3 PCR产物的回收及酶切 | 第30页 |
| 2．4．4 表达载体pETAFPo（m）的构建及在E．coli BL21中的诱导表达 | 第30-31页 |
| 2．5 表达产物的Tricine-SDS-PAGE电泳 | 第31-33页 |
| 2．6 抗真菌蛋白的活性检测 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-36页 |
| 3．1 利用PCR技术对Rs-AFP_2基因进行改造的结果及分析 | 第34-35页 |
| 3．2 Rs-AFPo及Rs-AFPm基因表达载体的构建及在E．coli中表达的结果与分析 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 4．1 影响基因高效表达的因素 | 第36-37页 |
| 4．2 PCR定点修饰技术的特点 | 第37页 |
| 4．3 不同抗真菌蛋白的协同作用 | 第37-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-46页 |
| 附录 1 | 第46-47页 |
| 附录 2 | 第47-48页 |
| 图版 | 第48-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
