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烟草花叶病毒和番茄花叶病毒在烟草上致病性差异的分子机理研究

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-10页
第一部分 文献综述第10-26页
 1 引言第10页
 2 移动蛋白研究进展第10-22页
  2.1 MPs的基本特性第10-16页
   2.1.1 MPs的编码策略第11页
   2.1.2 MPs之间的功能互补第11-13页
   2.1.3 MPs与细胞骨架的互作第13-15页
   2.1.4 胞间移动模型第15-16页
  2.2 MPs与病毒侵染能力第16-19页
   2.2.1 MPs与系统侵染第16-17页
   2.2.2 MPs与局部侵染第17-19页
  2.3 与MPs互作的寄主因子第19-20页
   2.3.1 DnaJ同源物第19页
   2.3.2 几丁质甲基化酶第19-20页
  2.4 胞间移动的调控第20-22页
   2.4.1 MPs的磷酸化第20-21页
   2.4.2 胞间连丝第21-22页
 3 内源大分子转运机制第22-26页
  3.1 胞间连丝第22-23页
  3.2 伴胞和筛管第23页
  3.3 MPs与光合产物运输第23-24页
  3.4 内源大分子转运第24-26页
第二部分 研究内容第26-70页
 引言第26-28页
 第一章 材料与方法第28-40页
  1.1 材料第28-29页
   1.1.1 毒源第28页
   1.1.2 抗血清第28页
   1.1.3 供试鉴别寄主第28页
   1.1.4 菌种、质粒第28页
   1.1.5 常用缓冲液的配制第28-29页
   1.1.6 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器第29页
  1.2 方法第29-40页
   1.2.1 病毒提纯第29-30页
    1.2.1.1 病毒粗提纯第29页
    1.2.1.2 利用蔗糖连续密度梯度进一步提纯病毒第29-30页
    1.2.1.3 提纯病毒紫外检测第30页
   1.2.2 病毒基因组RNA抽提第30-31页
    1.2.2.1 病毒核酸提取第30页
    1.2.2.2 甲醛变性电泳检测第30-31页
   1.2.3 RT-PCR技术第31-33页
    1.2.3.1 cDNA第一链合成第31页
    1.2.3.2 普通PCR反应第31-32页
    1.2.3.3 长片段模板PCR第32页
    1.2.3.4 PCR产物加A处理第32-33页
    1.2.3.5 PCR产物纯化第33页
   1.2.4 DNA克隆技术第33-36页
    1.2.4.1 连接方法第33页
    1.2.4.2 感受态细胞制备方法第33-34页
    1.2.4.3 转化第34页
    1.2.4.4 重组克隆的筛选与鉴定第34-35页
    1.2.4.5 重组质粒的提取和纯化第35-36页
   1.2.5 序列测定及分析第36-37页
   1.2.6 植物叶片中病毒蛋白的Western Blot的检测第37-38页
    1.2.6.1 植物可溶性蛋白样品的制备第37页
    1.2.6.2 免疫印迹杂交第37-38页
   1.2.7 体外转录方法第38页
   1.2.8 TAS-ELISA法定量检测ToMV/TMV第38-39页
   1.2.9 水杨酸测定第39-40页
 第二章 侵染性MP置换克隆的构建第40-53页
  1 材料与方法第40-44页
   1.1 材料第40页
   1.2 方法第40-44页
    1.2.1 引物第40-41页
    1.2.2 TMV-B与ToMV-S1的基因组结构示意图第41页
    1.2.3 方法第41-44页
  2 结果第44-50页
   2.1 ToMV-S1 MP克隆的获得第44页
   2.2 TMV-B与ToMV-S1 MP基因置换第44-46页
   2.3 置换克隆的鉴定第46-47页
   2.4 置换克隆的侵染性试验第47-48页
   2.5 后代病毒鉴定第48-50页
  3 讨论第50-53页
 第三章 T/OMP与TMV、ToMV侵染性差异分析第53-70页
  1 材料和方法第53-54页
   1.1 材料第53页
    1.1.1 毒源来源及保存第53页
    1.1.2 抗血清第53页
    1.1.3 其它第53页
   1.2 方法第53-54页
    1.2.1 寄主范围测定第53页
    1.2.2 枯斑大小测定第53页
    1.2.3 病毒系统侵染能力测定第53-54页
    1.2.4 SA测定第54页
  2 结果第54-57页
   2.1 T/OMP与TMV的寄主范围基本一致第54页
   2.2 T/OMP与TMV、ToMV诱发N基因介导的HR反应产生的枯斑大小差异第54-56页
    2.2.1 T/OMP与TMV的差异第54-55页
    2.2.2 T/OMP与ToMV的差异第55-56页
   2.3 T/OMP与TMV诱发HR反应产生的SA水平差异第56-57页
   2.4 T/OMP、TMV和ToMV系统侵染能力比较第57页
  3 讨论第57-70页
   3.1 MP基因不是ToMV不能系统侵染普通烟的病毒决定因子第57-59页
   3.2 MP基因影响N基因介导的HR反应产生的枯斑直径第59-64页
    3.2.1 MP基因与N抗性基因的关系第59-60页
    3.2.2 MP基因影响枯斑大小第60-61页
    3.2.3 MP基因的表达量与枯斑生成关系第61-62页
    3.2.4 MP基因功能的差异第62-64页
   3.3 MP基因在病毒系统侵染中的作用第64-70页
小结第70-71页
参考文献第71-76页
致谢第76-77页
附录A: 常用试剂的配制第77-81页
附录B: 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器第81-82页

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