| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| ·硝基还原酶的背景资料 | 第11-21页 |
| ·微生物降解硝基化合物的过程和反应机制的研究 | 第11-14页 |
| ·来自微生物的硝基还原酶催化还原反应机理及分布研究 | 第14-18页 |
| ·人们对来自不同菌属的硝基还原酶的特性进行研究 | 第18页 |
| ·对硝基还原酶基因调节的研究 | 第18-19页 |
| ·对硝基还原酶结构和功能的研究 | 第19-20页 |
| ·硝基还原酶的应用研究 | 第20-21页 |
| ·立题背景及其研究意义 | 第21-23页 |
| 第2章 实验设计与方案 | 第23-26页 |
| ·产生硝基还原酶的微生物菌株的筛选 | 第23-24页 |
| ·使用薄层层析方法来筛选产硝基还原酶的微生物菌株 | 第24页 |
| ·HPLC分析方法的建立 | 第24页 |
| ·运用LC/MS方法来确定菌株培养液能还原底物成对--(N-苯基甲酰基)邻胺基苯甲醚 | 第24页 |
| ·菌株生理生化特性测定 | 第24页 |
| ·16SrDNA序列测定 | 第24-25页 |
| ·菌株酶反应条件的优化 | 第25页 |
| ·菌株酶活的提高 | 第25-26页 |
| 第3章 产物对--(N-苯基甲酰基)邻胺基苯甲醚的分析方法研究 | 第26-29页 |
| ·试验材料和方法 | 第26-27页 |
| ·仪器与试剂 | 第26页 |
| ·高效液相色谱条件 | 第26页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第26-27页 |
| ·分析样品的预处理 | 第27页 |
| ·测定与计算 | 第27-28页 |
| ·外标法测定步骤 | 第27页 |
| ·效价计算 | 第27-28页 |
| ·精密度计算 | 第28页 |
| ·测定方法的准确度 | 第28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-29页 |
| 第4章 产硝基还原酶菌种的筛选 | 第29-36页 |
| ·材料与方法 | 第29-30页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·菌种来源 | 第29页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-30页 |
| ·在培养平皿上用化学显影法的初步筛选 | 第29页 |
| ·用薄层层析法初步筛选微生物菌株 | 第29-30页 |
| ·使用HPLC法对微生物菌株的复筛 | 第30页 |
| ·菌种No.134酶反应生成物的结构鉴定 | 第30页 |
| ·实验结果 | 第30-36页 |
| ·化学显影法的初步筛选 | 第30页 |
| ·薄层层析法初步筛选微生物菌株 | 第30页 |
| ·使用HPLC法对微生物菌株的复筛 | 第30-31页 |
| ·菌种No.134酶反应生成物的结构鉴定 | 第31-36页 |
| 第5章 细菌134的菌种分类 | 第36-47页 |
| ·材料试剂及仪器 | 第36-38页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·其他药品与试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-44页 |
| ·菌株生理生化特性测定 | 第38-39页 |
| ·明胶液化 | 第38页 |
| ·牛奶凝固和胨化测定 | 第38页 |
| ·淀粉水解测定 | 第38-39页 |
| ·纤维素水解 | 第39页 |
| ·硫化氢产生实验 | 第39页 |
| ·酪氨酸水解 | 第39页 |
| ·碳源利用试验 | 第39页 |
| ·16S DNA的抽提、测序和分析 | 第39-44页 |
| ·菌丝体的裂解 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增 | 第40页 |
| ·PCR扩增引物 | 第40页 |
| ·反应混合液 | 第40页 |
| ·PCR反应条件 | 第40页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第40-41页 |
| ·溶液配制及制胶 | 第40-41页 |
| ·电泳方法 | 第41页 |
| ·DNA的回收 | 第41页 |
| ·TG1感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·载体与载体连接 | 第42页 |
| ·pUCm-T载体 | 第42页 |
| ·载体连接 | 第42页 |
| ·转化 | 第42-43页 |
| ·质粒的抽提 | 第43页 |
| ·质粒DNA酶切及验证 | 第43-44页 |
| ·酶切 | 第43页 |
| ·电泳 | 第43页 |
| ·测序 | 第43页 |
| ·系统发育树分析 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-47页 |
| ·菌株134的生理生化特征 | 第44页 |
| ·16SrDNA系统发育树分析 | 第44-47页 |
| 第6章 提高菌种No.134产酶活性的研究 | 第47-55页 |
| ·材料与方法 | 第47-49页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·菌种来源 | 第47页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·菌株134的硝基还原酶的反应特性 | 第47-48页 |
| ·菌株134产生的硝基还原酶在培养液的分布 | 第47-48页 |
| ·不同反应温度和PH对酶活性的影响 | 第48页 |
| ·No.134菌株对不同底物的降解 | 第48页 |
| ·对菌种进行诱变育种 | 第48页 |
| ·菌种紫外处理 | 第48页 |
| ·菌种微波处理 | 第48页 |
| ·使用硫酸二乙酯和氯化锂进行诱变 | 第48页 |
| ·使用吖啶黄进行菌种处理 | 第48页 |
| ·对菌种培养过程进行优化 | 第48-49页 |
| ·诱变菌种No.134-13对各种碳源利用的研究 | 第49页 |
| ·诱变菌种No.134-13对各种氮源利用的研究 | 第49页 |
| ·诱变菌种No.134-13的培养基中氮源与培养时间的研究 | 第49页 |
| ·微量无机金属离子对于菌株No.134-13产酶活性的影响 | 第49页 |
| ·实验结果 | 第49-55页 |
| ·菌株134产生的硝基还原酶在培养液的分布 | 第49页 |
| ·不同反应温度和PH对酶活性的影响 | 第49-50页 |
| ·No.134菌株对不同底物的降解 | 第50-51页 |
| ·对菌种进行诱变育种 | 第51-52页 |
| ·菌种紫外处理 | 第51页 |
| ·菌种微波处理 | 第51页 |
| ·使用硫酸二乙酯和氯化锂进行诱变 | 第51页 |
| ·使用吖啶黄进行菌种处理 | 第51-52页 |
| ·对菌种培养过程进行优化 | 第52-53页 |
| ·诱变菌种No.134-13对各种碳源利用的研究 | 第52-53页 |
| ·诱变菌种No.134-13对各种氮源利用的研究 | 第53页 |
| ·诱变菌种No.134-13的培养基中氮源组合与培养时间的研究 | 第53-54页 |
| ·各种微量无机金属离子对于菌株No.134-13产酶活性的影响 | 第54-55页 |
| 第7章 结论及展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
