| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-32页 |
| ·HVT 研究概述 | 第15-18页 |
| ·HVT 与 MDV | 第15-16页 |
| ·HVT 的基因组结构与病原学特征 | 第16-17页 |
| ·HVT 的应用 | 第17-18页 |
| ·禽流感概述 | 第18-20页 |
| ·禽流感重组活载体疫苗的研究概况 | 第20-21页 |
| ·禽流感重组活载体疫苗 | 第20页 |
| ·禽流感重组活载体疫苗的优缺点 | 第20页 |
| ·禽流感重组活载体疫苗的影响因素 | 第20-21页 |
| ·禽流感重组活载体疫苗的研究进展 | 第21页 |
| ·细菌人工染色体的研究进展 | 第21-26页 |
| ·BAC 载体构建机理 | 第21-23页 |
| ·BAC 分子克隆化病毒的设计原则与构成要素 | 第23-24页 |
| ·基于细菌人工染色体（BAC）的基因工程疫苗的探索 | 第24-26页 |
| ·Red/ET 重组系统概述 | 第26-30页 |
| ·Red/ET 重组的产生及其特性 | 第26-28页 |
| ·Red／ET 重组的作用机理及其应用方式 | 第28-30页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 第二章 重组火鸡疱疹病毒转移载体的构建 | 第32-38页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·质粒载体、工程菌和毒株 | 第32页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第32页 |
| ·试验用 SPF 鸡胚 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-34页 |
| ·引物设计与合成 | 第33页 |
| ·重组病毒转移载体同源臂及加压筛选标记基因的扩增 | 第33页 |
| ·BAC 载体基本功能基因片段的制备 | 第33-34页 |
| ·重组病毒转移载体pGAB-gpt-BAC11 的构建 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-36页 |
| ·转移载体同源臂及加压筛选标记基因的鉴定 | 第34-35页 |
| ·BAC 载体基本功能序列鉴定 | 第35页 |
| ·重组病毒转移载体鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| ·制备BAC 载体基本功能基因序列 | 第36-37页 |
| ·表达Eco-gpt 的正选择标记基因 | 第37-38页 |
| 第三章 细菌人工染色体重组火鸡疱疹病毒的构建 | 第38-45页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·菌种、细胞、病毒与试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-42页 |
| ·电转化转移载体质粒pGAB-gpt-BAC11 到宿主菌DH10B | 第38-39页 |
| ·转移载体质粒的提取和纯化 | 第39-40页 |
| ·转染用HVT 感染细胞总DNA 的制备 | 第40-41页 |
| ·转移载体与感染细胞总DNA 共转染CEF | 第41页 |
| ·重组病毒的筛选与纯化 | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-43页 |
| ·转移载体与病毒感染细胞总DNA 的共转染启动病毒感染 | 第42页 |
| ·重组病毒的筛选及其纯化鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 感染性BAC 分子克隆化病毒的筛选 | 第45-55页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·菌种、细胞、病毒与试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-49页 |
| ·BAC 分子克隆化病毒的获得 | 第46页 |
| ·BAC 转化子的初步鉴定 | 第46页 |
| ·BAC 分子克隆化病毒DNA 的提取和纯化 | 第46-47页 |
| ·BAC DNA 的限制性内切酶酶切图谱分析 | 第47页 |
| ·BAC 分子克隆化病毒的PCR 鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组病毒的拯救 | 第48页 |
| ·重组病毒体外生长特性的测定 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-52页 |
| ·电转化筛选BAC 转化子 | 第49页 |
| ·BAC-DNA 的限制性内切酶酶切图谱分析结果 | 第49-50页 |
| ·BAC 分子克隆化病毒的PCR 鉴定结果 | 第50页 |
| ·从BAC DNA 拯救重组病毒 | 第50-51页 |
| ·重组病毒与野生病毒在CEF 上的噬斑形态比较 | 第51页 |
| ·重组病毒与野生病毒在CEF 上的生长曲线比较 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| 第五章 表达 H5 亚型禽流感病毒 HA 基因的重组火鸡疱疹病毒 RHVT-HA的构建 | 第55-65页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·质粒载体、工程菌和毒株 | 第55页 |
| ·工具酶和试剂 | 第55页 |
| ·试验用SPF 鸡胚及细胞系 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-60页 |
| ·引物设计与合成 | 第55-56页 |
| ·HA 基因的扩增 | 第56-57页 |
| ·真核表达质粒pcD-HA 的构建 | 第57页 |
| ·HA 基因表达盒的扩增 | 第57页 |
| ·间接免疫荧光检测HA 基因表达盒生物学活性 | 第57页 |
| ·选择标记基因rpsL-neo 表达盒的扩增 | 第57-58页 |
| ·Red/ET 重组将选择标记基因 rpsL-neo 表达盒替换 HVT U_S2区 | 第58-59页 |
| ·Red/ET 重组将HA 基因表达盒替换rpsL-neo 表达盒 | 第59页 |
| ·重组病毒的拯救 | 第59页 |
| ·重组病毒rHVT-HA 生物学活性检测 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-63页 |
| ·HA 基因的PCR 扩增结果 | 第60页 |
| ·真核表达重组质粒pcD-HA 的鉴定 | 第60-61页 |
| ·间接免疫荧光检测HA 基因表达盒生物学活性结果 | 第61页 |
| ·HA 基因表达盒的扩增结果 | 第61页 |
| ·选择标记基因rpsL-neo 表达盒的扩增结果 | 第61-62页 |
| ·PCR 验证rpsL-neo 表达盒替换HVT US2 区 | 第62页 |
| ·HA 基因表达盒替换rpsL-neo 表达盒的PCR 鉴定 | 第62-63页 |
| ·间接免疫荧光检测重组病毒rHVT-HA 生物学活性结果 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 全文结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简历 | 第72页 |
