| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 一 前言 | 第8-24页 |
| 1. Ghrelin的分子结构 | 第8-10页 |
| 2. Ghrelin的分布和定位 | 第10-11页 |
| 3. Ghrelin的分泌与调节 | 第11-12页 |
| 4. 生长激素促分泌剂及其受体 | 第12-13页 |
| 5. Ghrelin受体的分布与定位 | 第13-14页 |
| 6. Ghrelin的作用机制 | 第14-15页 |
| 7. Ghrelin的生物学功能 | 第15-22页 |
| ·对内分泌系统的影响 | 第15-17页 |
| ·对摄食和能量代谢的影响 | 第17-18页 |
| ·对胰腺内分泌及外分泌的影响 | 第18-19页 |
| ·对消化系统的影响 | 第19-20页 |
| ·对心血管系统的影响 | 第20-21页 |
| ·其它生物学功能 | 第21-22页 |
| 8. 展望 | 第22页 |
| 9. 本论文的研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 二 材料与方法 | 第24-56页 |
| 1. 实验动物 | 第24页 |
| 2. 载体、菌株及主要生化试剂 | 第24-25页 |
| 3. 实验仪器 | 第25页 |
| 4. 培养基 | 第25页 |
| 5. 试剂的配制 | 第25-31页 |
| 6. 试验方法 | 第31-56页 |
| ·乌骨鸡胃部组织基因组及总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·Ghrelin DNA的扩增 | 第32-33页 |
| ·DNA的回收 | 第33页 |
| ·DNA连接 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·DNA的转化 | 第34-35页 |
| ·菌落PCR | 第35页 |
| ·重组质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·质粒PCR | 第36页 |
| ·DNA的酶切 | 第36页 |
| ·测序 | 第36页 |
| ·Ghrelin cDNA的合成 | 第36-37页 |
| ·乌骨鸡Ghrelin cDNA的扩增 | 第37页 |
| ·cDNA的回收 | 第37页 |
| ·cDNA的连接转化与鉴定 | 第37-38页 |
| ·乌骨鸡Ghrelin编码片段的扩增 | 第38页 |
| ·Ghrelin编码片段及表达载体的酶切 | 第38-39页 |
| ·Ghrelin编码片段的连接 | 第39页 |
| ·Ghrelin编码片段的转化及鉴定 | 第39页 |
| ·原核表达质粒的诱导表达 | 第39页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第39-40页 |
| ·Western bolt分析 | 第40-41页 |
| ·表达产物的大量制备及纯化 | 第41-43页 |
| ·抗原的制备 | 第43页 |
| ·抗血清的制备 | 第43-44页 |
| ·抗血清效价的测定 | 第44-45页 |
| ·实验动物的分组及处理 | 第45-46页 |
| ·实验动物的饲养 | 第46页 |
| ·检测指标及测定方法 | 第46-56页 |
| 三 结果 | 第56-81页 |
| 1. 贵州竹乡乌骨鸡Ghrelin DNA的克隆 | 第56-59页 |
| 2. 贵州竹乡乌骨鸡Ghrelin cDNA的克隆 | 第59-60页 |
| 3. 贵州竹乡乌骨鸡Ghrelin基因的原核表达 | 第60-65页 |
| ·贵州竹乡乌骨鸡Ghrelin表达重组质粒的构建 | 第60-62页 |
| ·贵州竹乡乌骨鸡Ghrelin重组质粒的诱导表达 | 第62-63页 |
| ·贵州竹乡乌骨鸡Ghrelin重组质粒融合蛋白表达条件的优化 | 第63-65页 |
| 4. 融合蛋白的纯化 | 第65页 |
| 5. Westen blot检测 | 第65-66页 |
| 6. 抗原的制备 | 第66页 |
| 7. 抗血清的制备 | 第66-68页 |
| ·兔抗Ghrelin-KLH抗血清的制备 | 第66-67页 |
| ·鸡抗Ghrelin-KLH/融合蛋白抗血清的制备 | 第67-68页 |
| 8. 贵州竹乡乌骨鸡Ghrelin生理活性研究 | 第68-81页 |
| ·Ghrelin对鸡体重的影响 | 第68-70页 |
| ·Ghrelin对脂肪沉积及部份器官的影响 | 第70-71页 |
| ·Ghrelin对鸡摄食量的影响 | 第71-73页 |
| ·Ghrelin对鸡血浆T4、T3、GH、胰岛素、胰高血糖素、Ghrelin的影响 | 第73-77页 |
| ·Ghrelin对鸡血浆TP、ALb、CHO、TG、GLU、UA的影响 | 第77-81页 |
| 四 讨论 | 第81-84页 |
| 小结 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-97页 |
| 附录 | 第97-100页 |
| 致谢 | 第100-102页 |
