| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·概述 | 第10-20页 |
| ·生物固氮概述 | 第10-11页 |
| ·豆科植物中固氮共生体系研究 | 第11-12页 |
| ·固氮共生体系中与硫代谢有关的结瘤基因 | 第12-13页 |
| ·豆科植物固氮研究的发展方向 | 第13-14页 |
| ·启动子的研究概况 | 第14-20页 |
| ·本课题研究的背景、意义和内容 | 第20-22页 |
| ·本课题研究的背景、意义 | 第20-21页 |
| ·本课题研究内容和目标 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·培养基及生长条件 | 第22-24页 |
| ·培养基 | 第22-24页 |
| ·生长条件 | 第24页 |
| ·菌种保存 | 第24页 |
| ·抗菌素 | 第24页 |
| ·主要溶液、缓冲液和试剂 | 第24-26页 |
| ·核酸的提取 | 第26-29页 |
| ·碱变性法提取质粒DNA | 第26页 |
| ·大量制备质粒DNA | 第26-27页 |
| ·试剂盒快速小量提取质粒DNA | 第27-28页 |
| ·根瘤菌总DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·PCR扩增 | 第29-32页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·ORFa和ORFe 5’侧翼DNA片段P1、P2以及gus基因的扩增 | 第30-31页 |
| ·DNA片段P1、P2分别与gus基因融合 | 第31-32页 |
| ·DNA片段的酶切、电泳和回收纯化 | 第32-35页 |
| ·酶切克隆载体pGEM3zf(+) | 第32页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| ·DNA片段的回收纯化 | 第33-35页 |
| ·目的片段连入PGEM3ZF(+)载体 | 第35页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第35-36页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第36页 |
| ·重组质粒的细菌菌落的鉴定 | 第36-37页 |
| ·蓝白斑筛选----a互补现象的检测 | 第36页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的PCR检测 | 第37页 |
| ·克隆片段的测序分析 | 第37-38页 |
| ·启动子缺失片段的PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·表达质粒的构建 | 第39-41页 |
| ·分别双酶切载体pTR102和重组克隆质粒酶切体系如下: | 第39-40页 |
| ·表达载体的构建 | 第40页 |
| ·表达载体的转化和质粒提取 | 第40页 |
| ·酶切鉴定表达载体 | 第40-41页 |
| ·表达质粒转化根瘤菌HN01 | 第41页 |
| ·GUS活性的检测 | 第41-45页 |
| ·片段P1、P2启动子活性的定性检测 | 第41-42页 |
| ·GUS(β-Glucuronidase)活性的定量测定 | 第42-43页 |
| ·200mM硫浓度下不同硫源对P1片段启动子活性的影响 | 第43页 |
| ·DNA片段P1及其的5’端缺失片段的启动子活性检测 | 第43-44页 |
| ·DNA片段P1及其的5’端缺失片段在含有不同浓度的不同硫源培养基中的活性检测 | 第44-45页 |
| 第三章 启动子的鉴定与结构分析 | 第45-53页 |
| ·引言 | 第45-46页 |
| ·ORFA和ORFE 5’侧翼序列P1、P2的扩增并与GUS基因的融合 | 第46-48页 |
| ·P1片段5’端缺失片段的克隆并与GUS基因的融合 | 第48-49页 |
| ·表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·表达载体的转化 | 第50页 |
| ·ORFA和ORFE 5’侧翼序列启动子活性的定性检测 | 第50-51页 |
| ·DNA片段P1及其5’端缺失片段的GUS活性检测 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 启动子的诱导表达 | 第53-57页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·200MM硫浓度下不同硫源对P1片段启动子活性的影响 | 第53-54页 |
| ·DNA片段P1及其5’端缺失片段在含有不同浓度的不同硫源培养基中的启动子活性 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 总结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第67页 |
