| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-29页 |
| ·引言 | 第12-13页 |
| ·稻瘟菌的生物学特性 | 第13-17页 |
| ·稻瘟菌的生活史 | 第13-14页 |
| ·侵染过程以及致病机制 | 第14-16页 |
| ·稻瘟菌的生理小种 | 第16-17页 |
| ·稻瘟菌致病相关基因研究策略 | 第17-21页 |
| ·正向遗传学策略 | 第18-20页 |
| ·转座子介导的插入突变 | 第18页 |
| ·限制性内切酶介导的整合技术 | 第18-19页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第19-20页 |
| ·反向遗传学策略 | 第20-21页 |
| ·基于基因同源性的克隆法 | 第21页 |
| ·基于蛋白质的克隆法 | 第21页 |
| ·稻瘟菌致病相关基因克隆的研究进展 | 第21-25页 |
| ·分生孢子生长发育基因 | 第21-22页 |
| ·附着胞形成基因 | 第22-23页 |
| ·侵入过程和侵入菌丝扩展的基因 | 第23-24页 |
| ·编码其他致病生化因子的基因 | 第24-25页 |
| ·获得T-DNA 侧翼序列的方法 | 第25-27页 |
| ·本研究的目的意义和研究内容 | 第27-29页 |
| ·目的意义 | 第27-28页 |
| ·研究路线 | 第28-29页 |
| 2 DW-ACP-PCR 技术定位稻瘟菌突变体T-DNA 插入位点 | 第29-46页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·供试菌株 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·生化试剂 | 第29-30页 |
| ·PCR 引物设计 | 第30-31页 |
| ·突变体T-DNA 分子检测引物 | 第30页 |
| ·DW-ACP-PCR 引物 | 第30页 |
| ·菌液PCR 引物 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·稻瘟菌基因组提取 | 第31-32页 |
| ·大量菌丝的获得 | 第31页 |
| ·稻瘟菌基因组DNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·T-DNA 插入的分子检测 | 第32-33页 |
| ·质粒pBHt2 的提取 | 第32-33页 |
| ·PCR 检测突变体T-DNA 的插入 | 第33页 |
| ·突变体T-DNA 插入侧翼片段分离 | 第33-35页 |
| ·T-DNA 插入侧翼片段的克隆 | 第35-38页 |
| ·目标片段回收 | 第35-36页 |
| ·E.coli DH5α的感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·目标片段与载体连接 | 第37页 |
| ·连接产物转化 E.coli DH5α的感受态细胞 | 第37页 |
| ·重组质粒鉴定（菌液PCR） | 第37-38页 |
| ·测序以及序列分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-46页 |
| ·致病相关突变体基因组DNA 的提取结果 | 第38-39页 |
| ·T-DNA 插入的分子检测结果 | 第39页 |
| ·DW-ACP-PCR 扩增得到 T-DNA 插入位点的侧翼序列 | 第39-40页 |
| ·DW-ACP-PCR 产物的克隆与重组子的验证结果 | 第40-41页 |
| ·目标片段的测序与分析结果 | 第41-46页 |
| 3 Y34-0453 突变体的致病性丧失原因初探 | 第46-60页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·菌株 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·生化试剂 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-52页 |
| ·Y34－0453 致病性丧失的生物学分析 | 第46-48页 |
| ·菌落生长速度测定 | 第46-47页 |
| ·产孢量测定 | 第47页 |
| ·孢子萌发和附着胞形成的观察 | 第47页 |
| ·侵染钉形成的观察 | 第47页 |
| ·两种接种方法致病性比较 | 第47-48页 |
| ·有性交配分析 | 第48页 |
| ·突变体Y34-0453 致病性丧失的分子生物学研究 | 第48-52页 |
| ·T-DNA 插入位点的分子验证 | 第48-49页 |
| ·突变体 Y34-0453 以及野生菌株 Y34 的总 RNA 的提取 | 第49-50页 |
| ·cDNA 第一链合成 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR 检测T-DNA 插入位点下游基因的表达 | 第51-52页 |
| ·RT-PCR 产物的克隆和测序 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-60页 |
| ·Y34－0453 致病性丧失的生物学分析结果 | 第52-56页 |
| ·菌落生长速度 | 第52-53页 |
| ·产孢量的比较结果 | 第53-54页 |
| ·分生孢子萌发和附着胞形成的观察结果 | 第54-55页 |
| ·侵染钉形成的观察结果 | 第55-56页 |
| ·两种接种方法比较致病性的结果 | 第56页 |
| ·有性交配分析结果 | 第56页 |
| ·突变体Y34-0453 致病性丧失的分子生物学研究 | 第56-60页 |
| ·T-DNA 插入位点分子验证 | 第56-57页 |
| ·Y34-0453 以及Y34 的总RNA 的提取 | 第57页 |
| ·RT-PCR 检测T-DNA 插入位点下游基因的表达 | 第57-58页 |
| ·RT-PCR 产物的克隆、测序和分析 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| ·关于T-DNA 整合到宿体基因组的问题 | 第60页 |
| ·关于DW-ACP-PCR 技术 | 第60-61页 |
| ·关于突变体Y34-0453 的表型分析 | 第61-62页 |
| ·关于RT-PCR 检测突变体Y34-0453 T-DNA 插入位点邻近基因的表达 | 第62页 |
| ·有待进一步研究的问题 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
