| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-35页 |
| ·玉米纹枯病研究进展 | 第14-19页 |
| ·玉米纹枯病发生现状 | 第14-15页 |
| ·玉米纹枯病症状 | 第15页 |
| ·玉米纹枯病病原菌 | 第15-16页 |
| ·玉米纹枯病侵染源及侵染途径 | 第16-17页 |
| ·玉米纹枯病致病因子 | 第17-18页 |
| ·玉米纹枯病防治措施 | 第18-19页 |
| ·农业防治 | 第18页 |
| ·化学防治 | 第18-19页 |
| ·生物防治 | 第19页 |
| ·立枯丝核菌致病基因研究进展 | 第19-21页 |
| ·果胶酶研究进展 | 第21-28页 |
| ·果胶酶研究现状 | 第21页 |
| ·果胶酶分类 | 第21-23页 |
| ·果胶酶基因克隆 | 第23-25页 |
| ·果胶酶表达调控 | 第25-26页 |
| ·果胶酶活性测定 | 第26-27页 |
| ·果胶酶分离纯化 | 第27-28页 |
| ·真菌果胶酶与致病性的关系 | 第28页 |
| ·植物病原侵染与防御酶研究进展 | 第28-30页 |
| ·植物病原基因敲除功能研究 | 第30-31页 |
| ·真核表达系统概述 | 第31-32页 |
| ·选题的目的意义、研究内容和技术路线 | 第32-35页 |
| ·目的意义 | 第32-33页 |
| ·研究内容 | 第33-34页 |
| ·技术路线 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-63页 |
| ·材料和方法 | 第35-40页 |
| ·材料 | 第35-40页 |
| ·供试菌株 | 第35页 |
| ·菌株与质粒 | 第35页 |
| ·主要生化和分子生物学试剂、酶 | 第35-36页 |
| ·仪器 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·贮存液配制 | 第37页 |
| ·溶液配制 | 第37-40页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶cDNA 克隆 | 第40-50页 |
| ·引物设计 | 第40-41页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 总RNA 的提取（Trizol 法） | 第41-42页 |
| ·紫外检测RNA 产率和纯度 | 第42页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第42-43页 |
| ·目的基因3’末端的分离（3’-RACE） | 第43-46页 |
| ·目的基因cDNA 3’末端的扩增 | 第43-44页 |
| ·PCR 产物回收 | 第44-45页 |
| ·载体连接 | 第45页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌感受态的转化 | 第46页 |
| ·序列测定 | 第46页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 菌丝体DNA 的抽提 | 第46-47页 |
| ·目的基因DNA 5’端序列的TAIL-PCR 扩增 | 第47-49页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶基因DNA 与全长cDNA 序列的克隆 | 第49-50页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶基因全长序列的生物信息学分析 | 第50页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶pg 基因的表达分析 | 第50-51页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶pg 基因在玉米中的表达分析 | 第50-51页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶pg 基因在不同底物中的表达分析 | 第51页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶在毕赤酵母中的表达 | 第51-62页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶成熟肽基因序列的分离 | 第51-52页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶成熟肽序列的限制性酶切位点分析 | 第51页 |
| ·引物设计 | 第51-52页 |
| ·质粒提取 | 第52-53页 |
| ·质粒DNA 的双酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·序列测定 | 第54页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶pg 基因在毕赤酵母中的表达 | 第54-62页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·线性化质粒DNA 制备 | 第55-56页 |
| ·线性化酶切 | 第55页 |
| ·线状质粒DNA 的纯化 | 第55-56页 |
| ·酵母转化 | 第56-57页 |
| ·Pichia pastoris G5115 感受态细胞的制备（电击法） | 第56页 |
| ·重组表达质粒电击转化感受态酵母G5115 细胞 | 第56-57页 |
| ·酵母转化子甲醇利用表型的平板筛选 | 第57页 |
| ·酵母转化子的PCR 鉴定 | 第57-58页 |
| ·pPIC9K AOX1 通用引物鉴定 | 第57-58页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶pg 基因的特异性引物鉴定 | 第58页 |
| ·外源基因多拷贝整合转化子筛选 | 第58-59页 |
| ·酵母工程菌的培养和内切多聚半乳糖醛酸酶的诱导分泌表达 | 第59-60页 |
| ·表达产物的生物学活性检测 | 第60页 |
| ·表达产物内切多聚半乳糖醛酸酶的SDS-PAGE 分析 | 第60页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第60-61页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第60-61页 |
| ·样品蛋白质浓度的测定 | 第61页 |
| ·内切多聚半乳糖醛酸酶工程菌产酶曲线的测定 | 第61-62页 |
| ·表达产物内切多聚半乳糖醛酸酶的纯化 | 第62页 |
| ·重组蛋白对玉米致病性分析 | 第62-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-106页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 总RNA 的提取 | 第63页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg cDNA 基因的分离 | 第63-66页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 基因3’-末端的分离 | 第63-64页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 基因5’-末端的分离 | 第64-65页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 基因ORF cDNA 的分离及扩增片断的序列拼接 | 第65-66页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 基因组DNA 的扩增 | 第66-68页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 基因组DNA 的提取 | 第66-67页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 基因组DNA 的扩增 | 第67-68页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第68-81页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 基因的核苷酸序列分析 | 第68-74页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 基因的氨基酸序列分析 | 第74-81页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶pg 基因的表达分析 | 第81-84页 |
| ·Rhizoctonia solani i AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶pg 基因在玉米中的表达分析 | 第81-82页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶pg 基因在不同底物中的表达分析 | 第82-84页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 成熟肽基因序列的分离 | 第84-87页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 成熟肽序列的限制性酶切位点分析结果 | 第84-85页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 编码序列的分离 | 第85-87页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶pg 基因在毕赤酵母中的表达 | 第87-106页 |
| ·酵母表达载体的构建和鉴定 | 第87-95页 |
| ·表达质粒转化Pichia pastoris G5115 及酵母转化子的筛选 | 第95-100页 |
| ·酵母转化子的甲醇利用表型的筛选 | 第95-97页 |
| ·酵母转化子的PCR 鉴定 | 第97-99页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA pg 基因酵母多拷贝整合子的筛选 | 第99-100页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶pg 基因在Pichia pastoris 中的高效表达及表达产物检测 | 第100-106页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶pg 基因在Pichia pastoris 中的诱导表达和高表达酵母菌株的筛选 | 第100页 |
| ·Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶酵母工程菌产酶曲线的测定 | 第100-101页 |
| ·表达产物内切多聚半乳糖醛酸酶PG1 和PG3 的纯化 | 第101-103页 |
| ·重组蛋白接种玉米叶片的致病性分析 | 第103-106页 |
| 4 讨论 | 第106-110页 |
| ·立枯丝核菌Rhizoctonia solani AG1-IA 内切多聚半乳糖醛酸酶的基因克隆 | 第106-108页 |
| ·内切多聚半乳糖醛酸酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第108页 |
| ·内切多聚半乳糖醛酸酶基因对玉米的致病作用及玉米的防卫反应 | 第108-110页 |
| 5 结论和建议 | 第110-112页 |
| ·结论 | 第110-111页 |
| ·建议 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第124页 |
