| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 前言 | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-20页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第8-9页 |
| ·pET载体介绍及应用 | 第8页 |
| ·硫氧还蛋白(Trx) | 第8-9页 |
| ·绿色荧光蛋白 | 第9-15页 |
| ·发展历史 | 第10页 |
| ·GFP的结构、生化特性、发光机制、光谱特性 | 第10-12页 |
| ·GFP的改进 | 第12页 |
| ·GFP的应用研究进展 | 第12-15页 |
| ·构建并利用双顺反子生产目的产物的研究 | 第15-17页 |
| ·构建融合基因表达载体的研究 | 第15-16页 |
| ·构建双顺反子表达载体的研究 | 第16-17页 |
| ·本课题的研究目的及研究内容 | 第17-19页 |
| ·研究目的 | 第17页 |
| ·研究内容 | 第17-19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-30页 |
| ·实验材料 | 第20-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·培养基及常用溶液的配制 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·菌株的培养 | 第25页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·PCR反应 | 第25-27页 |
| ·酶切反应 | 第27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·质粒及连接产物转化 | 第27页 |
| ·阳性重组克隆的筛选与鉴定 | 第27-28页 |
| ·电泳分析 | 第28页 |
| ·目的条带的回收 | 第28页 |
| ·E. coli质粒的小量提取（SDS-碱裂解法） | 第28-30页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第30-46页 |
| ·pET32a-Trx的构建 | 第30-32页 |
| ·PCR扩增Trx基因 | 第30-31页 |
| ·pET32a-Trx的构建 | 第31-32页 |
| ·pET32a-GFP的构建 | 第32-34页 |
| ·PCR扩增GFP基因 | 第32-33页 |
| ·pET32a-GFP的构建 | 第33-34页 |
| ·pET32a-Trx-GFPR融合型质粒（双顺反子间无间隔序列）的构建 | 第34-38页 |
| ·PCR扩增GFP基因 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增Trx基因 | 第35-36页 |
| ·重叠延伸PCR扩增 | 第36-38页 |
| ·pET32a-Trx-GFPD质粒（间隔序列为TAAATG）的构建 | 第38-40页 |
| ·PCR扩增GFP基因 | 第38-39页 |
| ·PCR扩增Trx基因 | 第39页 |
| ·重叠延伸PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·pET32a-Trx-GFPL（间隔序列为TAATG）的构建 | 第40-43页 |
| ·PCR扩增GFP基因 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增Trx基因 | 第41页 |
| ·重叠延伸PCR扩增 | 第41-43页 |
| ·诱导表达分析 | 第43-46页 |
| ·菌体诱导培养 | 第43页 |
| ·绿色荧光蛋白的测定 | 第43-44页 |
| ·GFP的定量表达分析 | 第44-46页 |
| 第四章 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录 | 第51-63页 |
| 科研情况 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
