| 目录 | 第1-5页 |
| 图表目录 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一部分 构建含有 AP-1应答元件的质粒 | 第10-23页 |
| 1 实验材料 | 第10-13页 |
| ·质粒 | 第10-11页 |
| ·菌株 | 第11页 |
| ·工具酶、酶切缓冲液及DNA Marker | 第11页 |
| ·主要化学试剂 | 第11页 |
| ·试剂盒 | 第11页 |
| ·主要仪器及设备 | 第11-12页 |
| ·E.coli用培养基的配制 | 第12页 |
| ·主要溶液配方 | 第12-13页 |
| ·制备感受态细胞相关溶液 | 第12页 |
| ·抗生素的配制 | 第12页 |
| ·大量提取质粒 DNA的相关溶液 | 第12-13页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳缓冲液及凝胶的配制 | 第13页 |
| ·常用缓冲液的配制 | 第13页 |
| 2 实验方法 | 第13-19页 |
| ·单链复性 | 第13-14页 |
| ·酶切消化 | 第14页 |
| ·连接 | 第14-15页 |
| ·转化 | 第15页 |
| ·鉴定 | 第15-16页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第16页 |
| ·质粒 DNA的小提 | 第16-17页 |
| ·质粒 DNA的大量提取 | 第17-19页 |
| ·重组质粒 DNA浓度的测定 | 第19页 |
| ·DNA的纯化回收 | 第19页 |
| 3 实验结果 | 第19-23页 |
| ·确定并合成 TRE单链 | 第19页 |
| ·单链复性 | 第19-20页 |
| ·反复插入 TRE，构建克隆 | 第20页 |
| ·检测 | 第20-21页 |
| ·质粒大提 | 第21页 |
| ·质粒线性化并回收线性化的DNA | 第21-23页 |
| 第二部分 构建 AP-1信号传导细胞模型 | 第23-36页 |
| 4 实验材料 | 第23-24页 |
| ·细胞用培养基及血清 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·细胞培养用耗材 | 第23页 |
| ·所用仪器及设备 | 第23-24页 |
| ·细胞冻存液的配制 | 第24页 |
| ·细胞裂解液的配制 | 第24页 |
| 5 实验方法 | 第24-25页 |
| ·恒定表达细胞株的构建 | 第24页 |
| ·细胞冻存 | 第24-25页 |
| ·细胞复苏 | 第25页 |
| ·细胞裂解 | 第25页 |
| 6 实验结果 | 第25-36页 |
| ·挑选细胞单克隆 | 第25-26页 |
| ·利用荧光显微镜进行第一次筛查 | 第26页 |
| ·利用流式细胞术进行第二次筛查 | 第26页 |
| ·再次利用流式细胞术进行第三次筛查 | 第26-28页 |
| ·细胞的冻存 | 第28页 |
| ·通过反复传代检测细胞株的稳定性 | 第28-31页 |
| ·反复传代后通过荧光显微镜进行检测 | 第28-31页 |
| ·反复传代后通过流式细胞术进行检测 | 第31页 |
| ·通过细胞的冻存与复苏检测细胞株的稳定性 | 第31页 |
| ·通过荧光分光光度计测定细胞模型的 EC50 | 第31-36页 |
| 第三部分 利用细胞模型筛选 AP-1信号传导通路的阳性刺激 | 第36-38页 |
| 7 实验材料 | 第36-37页 |
| ·组合化学样本库 | 第36页 |
| ·细胞用培养基及血清 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·细胞培养用耗材 | 第36页 |
| ·所用仪器及设备 | 第36-37页 |
| 8 实验方法 | 第37页 |
| ·利用细胞模型筛选 AP-1信号传导通路的阳性刺激 | 第37页 |
| 9 实验结果 | 第37-38页 |
| ·利用荧光显微镜进行观察 | 第37-38页 |
| 讨论 | 第38-40页 |
| 小结 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 综述 | 第45-55页 |
| 英文略语表 | 第55-57页 |
| 简历 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 硕士学位论文原创性、真实性声明 | 第60-61页 |
| 硕士学位论文及论文相关实验材料使用授权书 | 第61页 |