| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 一 前言 | 第10-19页 |
| 1 甘蔗黄叶综合症(Sugarcane Yellow leaf Syndrome.SYLS)及其病原 | 第10-12页 |
| ·甘蔗黄叶综合症及其危害 | 第10-11页 |
| ·甘蔗黄叶综合症病原 | 第11页 |
| ·甘蔗黄叶综合症病原的传播和寄主 | 第11-12页 |
| 2 黄症病毒科(Luteoviridae)的分类与基因组结构 | 第12-15页 |
| ·黄症病毒科的分类 | 第12页 |
| ·基因组结构 | 第12-15页 |
| 3 黄症病毒与蚜虫宿主细胞组分的分子反应 | 第15-16页 |
| 4 CP基因及其表达产物介导的植物抗性 | 第16-18页 |
| ·蛋白介导的抗性 | 第16页 |
| ·非蛋白介导的抗性 | 第16-17页 |
| ·黄症病毒科成员CP基因转基因研究现状 | 第17-18页 |
| 5 本研究的内容、目的与意义 | 第18-19页 |
| 二 材料和方法 | 第19-31页 |
| 1 实验材料 | 第19页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·试剂载体及菌株 | 第19页 |
| ·主要实验仪器 | 第19页 |
| 2 实验方法 | 第19-31页 |
| ·甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因的克隆 | 第19-24页 |
| ·甘蔗叶片总RNA提取 | 第19-20页 |
| ·第一链cDNA的获得 | 第20页 |
| ·目的片段获得 | 第20-21页 |
| ·目的片段回收 | 第21页 |
| ·目的片段与载体连接 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备与转化 | 第22页 |
| ·鉴定阳性克隆 | 第22-24页 |
| ·目的片段测序 | 第24页 |
| ·甘蔗黄叶病毒外壳蛋白(SCYLV-CP)基因的原核表达 | 第24-27页 |
| ·SCYLV-CP基因的分子鉴定及回收 | 第24-25页 |
| ·原核表达载体质粒pET-29a(+)的提取、酶切及回收 | 第25-26页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌BL21感受态细胞的制备与转化 | 第26页 |
| ·原核表达载体拟重组子的鉴定 | 第26-27页 |
| ·表达目的蛋白检测 | 第27-28页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第27页 |
| ·表达菌的裂解 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第27-28页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第28页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第28-31页 |
| ·天然条件下样品的制备 | 第28-29页 |
| ·蛋白纯化柱的准备 | 第29页 |
| ·表达蛋白的过柱纯化 | 第29页 |
| ·ELISA法检测目的蛋白 | 第29-31页 |
| 三 结果及分析 | 第31-40页 |
| 1 SCYLV外壳蛋白基因的克隆 | 第31-36页 |
| ·甘蔗总RNA的提取 | 第31页 |
| ·甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因的获得 | 第31-32页 |
| ·甘蔗黄叶病毒外科蛋白基因回收 | 第32页 |
| ·连接和转化 | 第32-33页 |
| ·甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因序列及分析 | 第33-35页 |
| ·甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因的氨基酸序列分析 | 第35-36页 |
| 2 甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因的原核表达 | 第36-40页 |
| ·原核表达载体的构建和验证 | 第36-38页 |
| ·拟重组子检测 | 第38页 |
| ·甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因诱导表达情况 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·目的蛋白检测 | 第40页 |
| 四 讨论 | 第40-45页 |
| 1 黄症病毒科内成员之间和同种不同株系间CP基因的变异与分类 | 第40-43页 |
| 2 关于甘蔗RNA的提取 | 第43-44页 |
| 3 关于cDNA第一链的合成所采用的酶 | 第44页 |
| 4 有关研究的后续工作 | 第44-45页 |
| 五 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录一 | 第51-53页 |
| 附录二 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
