| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-23页 |
| ·甘露聚糖酶简介 | 第10-13页 |
| ·大肠杆菌原核表达系统 | 第13-18页 |
| ·pET表达系统 | 第18-21页 |
| ·研究目的和技术路线 | 第21-23页 |
| 第二章 材料与仪器 | 第23-28页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·菌种&质粒 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·酶类 | 第24页 |
| ·DNA & Protein Marker: | 第24-25页 |
| ·培养基 & 其他试剂 | 第25-28页 |
| 第三章 实验方法 | 第28-43页 |
| ·重组质粒pET-32a-man的构建、转化与表达 | 第28-37页 |
| ·目的片段man与载体pET-32a的制备 | 第28-31页 |
| ·重组质粒pET-32a-man的构建及克隆 | 第31-33页 |
| ·重组质粒转化BL21(DE3) | 第33-35页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·重组质粒转化Rosetta(DE3)及诱导表达 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pET-22b-man的构建、转化与表达 | 第37-43页 |
| ·目的片段man与载体pET-22b的制备 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pET-22b-man的构建及克隆 | 第38页 |
| ·重组质粒转化BL21(DE3) | 第38-39页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第39-40页 |
| ·重组菌诱导表达情况的确定 | 第40-41页 |
| ·β-甘露聚糖酶的定性分析 | 第41-42页 |
| ·重组β-甘露聚糖酶的Km测定 | 第42页 |
| ·温度和pH对酶活力的影响 | 第42页 |
| ·酶的热稳定性和pH稳定性 | 第42-43页 |
| 第四章 实验结果 | 第43-59页 |
| ·重组质粒pET-32a-man的构建、转化与表达 | 第43-50页 |
| ·酶切man基因 | 第43页 |
| ·载体pET-32a的酶切 | 第43页 |
| ·pET-32a-man的双酶切鉴定 | 第43-45页 |
| ·DH5α-pET-32a-man测序结果 | 第45-46页 |
| ·菌落PCR鉴定BL21(DE3)-pET-32a-man重组子 | 第46-47页 |
| ·重组菌的诱导表达及蛋白检测 | 第47页 |
| ·诱导条件的优化 | 第47-49页 |
| ·菌落PCR鉴定Rosetta(DE3)-pET-32a-man重组子 | 第49页 |
| ·Rosetta(DE3)-pET-32a-man诱导检测 | 第49-50页 |
| ·重组质粒pET-22b-man的构建、转化与表达 | 第50-59页 |
| ·酶切man基因 | 第50页 |
| ·载体pET-22b的酶切 | 第50-51页 |
| ·pET-22b-man的双酶切鉴定 | 第51页 |
| ·pE-T22b-man测序结果 | 第51-53页 |
| ·菌落PCR鉴定重组质粒pET-22b-man | 第53页 |
| ·重组菌诱导产物检测 | 第53-54页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·重组β-甘露聚糖酶生物活性定性检测 | 第55-56页 |
| ·Km值测定 | 第56-57页 |
| ·温度和pH对酶活力的影响 | 第57页 |
| ·温度和pH对酶稳定性的影响 | 第57-59页 |
| 第五章 讨论 | 第59-66页 |
| 1 表达系统的选择 | 第59-61页 |
| 2 载体pET-32a的选择 | 第61页 |
| 3 载体pET-22b的选择 | 第61-62页 |
| 4 诱导表达的问题 | 第62-64页 |
| 5 关于β-甘露聚糖酶的活性 | 第64-66页 |
| 第六章 结论与展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录1:英文缩略词 | 第73-74页 |
| 附录2:man酶切位点 | 第74-79页 |
| 附录3:pET-32a质粒图谱 | 第79-80页 |
| 附录4:pET-22b质粒图谱 | 第80-81页 |
| 附录5:man稀有密码子分析 | 第81-82页 |
| 附录6:pET-32a-man测序峰形图 | 第82-84页 |
| 附录7:pET-22b-man测序峰形图 | 第84-85页 |
| 在校期间发表的论文 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
