| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一部分 前言 | 第9-19页 |
| ·卵透明带概述 | 第9-12页 |
| ·卵透明带的生物学特征 | 第9-10页 |
| ·卵透明带避孕疫苗的避孕效能 | 第10-12页 |
| ·重组卵透明带抗原的研究概况 | 第12-15页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第12-13页 |
| ·酵母表达系统 | 第13-14页 |
| ·哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统 | 第14页 |
| ·其他表达系统 | 第14-15页 |
| ·嵌合肽疫苗和 DNA疫苗 | 第15-17页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| ·本研究的技术路线 | 第18-19页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第19-37页 |
| ·实验材料与仪器 | 第19-23页 |
| ·主要材料与试剂 | 第19-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-23页 |
| ·重组真核表达质粒pPICZαA-pZP3α的构建 | 第23-28页 |
| ·含有目的基因的pZ58质粒和载体质粒pPICZαA的获得 | 第24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24-25页 |
| ·基因扩增 | 第25页 |
| ·构建重组质粒pPICZαA-pZP3α | 第25-26页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第26-28页 |
| ·重组质粒pPICZαA-pZP3α在毕赤酵母中的表达 | 第28-32页 |
| ·酵母感受态的制备和转化 | 第28-29页 |
| ·酵母转化子的筛选鉴定 | 第29-30页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及酵母工程菌的筛选 | 第30-31页 |
| ·GS115-pZP3α工程菌培养条件优化 | 第31-32页 |
| ·高密度发酵生产rpZP3α抗原 | 第32页 |
| ·rpZP3α的分离纯化 | 第32-33页 |
| ·纯化后目的蛋白纯度和回收率的计算 | 第33页 |
| ·兔抗rpZP3α抗体的制备 | 第33-34页 |
| ·抗原乳剂的制备 | 第33页 |
| ·免疫途径和方法 | 第33-34页 |
| ·兔抗rpZP3α抗体的活性鉴定 | 第34-35页 |
| ·兔抗rpZP3α抗体与rpZP3α及天然pZP3抗原的反应比较 | 第34页 |
| ·间接免疫荧光法检测抗血清与猪卵透明带的反应 | 第34-35页 |
| ·兔抗rpZP3α抗体对猪精卵结合的影响 | 第35页 |
| ·猪卵子的获取 | 第35页 |
| ·猪精子的获取及处理 | 第35页 |
| ·猪精卵结合的观察 | 第35页 |
| ·兔抗rpZP3α抗体对小鼠精卵结合的影响 | 第35-36页 |
| ·小鼠卵子的获取 | 第35页 |
| ·小鼠精子的获取及处理 | 第35-36页 |
| ·小鼠精卵的结合 | 第36页 |
| ·rpZP3α免疫对小鼠卵巢功能的影响 | 第36-37页 |
| 第三部分 实验结果 | 第37-49页 |
| ·PCR法获得目的基因片段 | 第37页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的序列测定结果 | 第38页 |
| ·酵母转化重组子的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·诱导表达产物的 SDS-PAGE和Western blot分析 | 第39页 |
| ·GS115-pZP3α工程菌培养条件的优化 | 第39-42页 |
| ·不同pH对pZP3α表达的影响 | 第39-40页 |
| ·不同甲醇浓度对pZP3α表达的影响 | 第40-41页 |
| ·不同诱导时间对 pZP3α表达的影响 | 第41-42页 |
| ·rpZP3α的发酵制备和鉴定 | 第42-43页 |
| ·纯化后rpZP3α产量、纯度和回收率的计算 | 第43页 |
| ·兔抗rpZP3α抗体与rpZP3α及天然 pZP3抗原的反应比较 | 第43-44页 |
| ·间接免疫荧光法检测抗血清与猪卵透明带的反应 | 第44-45页 |
| ·兔抗rpZP3α对猪和小鼠精卵结合的影响 | 第45-46页 |
| ·rpZP3α免疫小鼠对卵巢功能的影响 | 第46-49页 |
| 第四部分 讨论 | 第49-57页 |
| ·rpZP3α抗原在毕赤酵母中的表达与分析 | 第49-52页 |
| ·重组 GS115-ZP3α工程菌表达的影响因素分析 | 第52-54页 |
| ·rpZP3α及抗rpZP3α抗体免疫活性的分析 | 第54-55页 |
| ·结论 | 第55-56页 |
| ·工作展望 | 第56-57页 |
| References | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-83页 |
| 附录Ⅰ 本研究中所用常规实验方法 | 第63-70页 |
| 附录Ⅱ 本研究中所用试剂配方 | 第70-79页 |
| 附录Ⅲ-1 质粒pPICZαA及多克隆位点图谱 | 第79-80页 |
| 附录Ⅲ-2 质粒pPICZαA-pZP3α测序图谱 | 第80-82页 |
| 附录Ⅳ 英文缩略词索引 | 第82-83页 |
| 在校期间发表的论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
