| 第一部分 猪PNAS-4基因的结构与功能研究 | 第1-86页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-30页 |
| ·PNAS-4基因研究进展 | 第14-15页 |
| ·猪的PNAS-4基因研究现状 | 第14页 |
| ·其它物种PNAS-4基因的研究现状 | 第14-15页 |
| ·细胞凋亡 | 第15-21页 |
| ·细胞凋亡概述 | 第15页 |
| ·生物学意义 | 第15-16页 |
| ·细胞凋亡的形态学和生化特征 | 第16页 |
| ·研究历程 | 第16-17页 |
| ·细胞凋亡的过程 | 第17-20页 |
| ·细胞凋亡的检测方法 | 第20-21页 |
| ·高尔基体的研究进展 | 第21-24页 |
| ·高尔基体的形态结构 | 第21-22页 |
| ·生物学功能 | 第22-24页 |
| ·研究现状 | 第24页 |
| ·实时定量PCR | 第24-27页 |
| ·原理 | 第25页 |
| ·检测技术 | 第25-27页 |
| ·蛋白质的亚细胞定位 | 第27-28页 |
| ·亚细胞定位在基因功能研究中的地位 | 第27页 |
| ·蛋白质亚细胞定位方法 | 第27-28页 |
| ·变性高效液相色谱 | 第28-30页 |
| ·DHPLC概念及原理 | 第29页 |
| ·主要应用领域 | 第29-30页 |
| 2 研究目的与意义 | 第30-31页 |
| 3 材料与方法 | 第31-50页 |
| ·材料 | 第31-37页 |
| ·核酸样品 | 第31页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第31-34页 |
| ·RNA提取及检测用缓冲液 | 第34页 |
| ·主要培养基 | 第34-35页 |
| ·原核表达结果检测所用缓冲液 | 第35页 |
| ·真核细胞转染试剂盒与染色液 | 第35-36页 |
| ·其它生化试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-50页 |
| ·本研究的整体思路 | 第37页 |
| ·总RNA的提取、检测和DNase-Ⅰ处理 | 第37-39页 |
| ·反转录、扩增检测 | 第39页 |
| ·PCR产物的纯化、克隆与测序 | 第39-41页 |
| ·cDNA全长的获得 | 第41-42页 |
| ·基因的单核苷酸多态检测 | 第42-44页 |
| ·时空表达谱分析 | 第44-45页 |
| ·细胞培养 | 第45-46页 |
| ·原核表达载体的构建与表达 | 第46-47页 |
| ·荧光表达载体的构建与转染 | 第47-48页 |
| ·超表达载体的构建与转染 | 第48-49页 |
| ·数据统计与分析 | 第49-50页 |
| 4 结果与分析 | 第50-75页 |
| ·总RNA及反转录cDNA模板检测 | 第50-51页 |
| ·总RNA的甲醛变性胶电泳检测结果 | 第50页 |
| ·cDNA模板质量及引物扩增效果的检测 | 第50-51页 |
| ·PNAS-4基因cDNA全长的获得 | 第51-52页 |
| ·获得完整的5’UTR | 第51-52页 |
| ·扩增填补cDNA序列中的gap | 第52页 |
| ·PNAS-4基因的mRNA结构特点 | 第52-54页 |
| ·PANS-4蛋白质结构特点 | 第54-57页 |
| ·保守功能结构域DUF862 | 第54-55页 |
| ·蛋白质结构的保守性 | 第55-57页 |
| ·PNAS-4基因组结构特点 | 第57-64页 |
| ·第二内含子多态检测 | 第57-59页 |
| ·3’UTR多态检测 | 第59-61页 |
| ·基因组序列遗传变异分析 | 第61-64页 |
| ·PNAS-4染色体位置与QTLs关联分析 | 第64-65页 |
| ·人的同源基因启动子结构特点 | 第65-66页 |
| ·Real-time PCR结果分析 | 第66-69页 |
| ·组织表达谱分析 | 第66-68页 |
| ·组织和细胞中该基因的表达差异 | 第68页 |
| ·骨胳肌不同发育阶段表达谱结果分析 | 第68-69页 |
| ·原核表达结果 | 第69-71页 |
| ·表达质粒P4-pET28c的酶切鉴定 | 第69-70页 |
| ·表达质粒P4-pET28c在大肠杆菌中的表达结果 | 第70-71页 |
| ·蛋白质CGI-146亚细胞定位 | 第71-72页 |
| ·荧光表达质粒P4-pGFP的酶切鉴定 | 第71页 |
| ·利用荧光表达载体进行亚细胞定位结果 | 第71-72页 |
| ·超表达结果 | 第72-75页 |
| ·超表达质粒P4-pcDNA3.1的酶切鉴定结果 | 第72页 |
| ·对该基因进行超表达后的实验结果 | 第72-75页 |
| 5 讨论 | 第75-84页 |
| ·关于RNA的质量问题 | 第75-76页 |
| ·结构与功能关系讨论 | 第76-79页 |
| ·关于mRNA的结构功能域 | 第76页 |
| ·关于蛋白质序列的功能元件 | 第76-77页 |
| ·关于猪的PNAS-4基因组的结构特点 | 第77-78页 |
| ·关于启动子区域的调控因子 | 第78-79页 |
| ·基因表达谱的讨论 | 第79-81页 |
| ·关于组织表达谱 | 第79-80页 |
| ·关于正常组织与癌化细胞表达差异的讨论 | 第80页 |
| ·关于骨胳肌不同发育时期表达谱的讨论 | 第80页 |
| ·关于RT-PCR与Real-time PCR方法的讨论 | 第80-81页 |
| ·原核表达无特异产物的原因 | 第81-82页 |
| ·亚细胞定位结果的讨论 | 第82页 |
| ·关于凋亡实验结果的讨论 | 第82-84页 |
| 6 小结 | 第84-86页 |
| ·已经获得的结果 | 第84页 |
| ·本研究的创新点与特色 | 第84-85页 |
| ·本研究的不足 | 第85页 |
| ·由本研究引出的问题 | 第85-86页 |
| 第二部分 猪α1,3-GT基因敲除载体的构建 | 第86-114页 |
| 中文摘要 | 第86-87页 |
| Abstract | 第87-89页 |
| 1 文献综述 | 第89-98页 |
| ·器官移植 | 第89页 |
| ·异种器官移植 | 第89-93页 |
| ·异种器官移植概述 | 第89-90页 |
| ·异种动物供体的选择 | 第90-91页 |
| ·异种移植障碍 | 第91-92页 |
| ·抑制α1,3-GT表达的应对措施 | 第92-93页 |
| ·α1,3-GT基因的研究进展 | 第93-98页 |
| ·α1,3-GT的特性 | 第93-94页 |
| ·猪的α1,3-GT研究情况 | 第94-96页 |
| ·其它哺乳动物α1,3-GT的研究情况 | 第96-98页 |
| 2 目的与意义 | 第98-99页 |
| 3.材料与方法 | 第99-105页 |
| ·材料 | 第99-100页 |
| ·DNA样品 | 第99页 |
| ·克隆及打靶载体 | 第99-100页 |
| ·生化试剂 | 第100页 |
| ·方法 | 第100-105页 |
| ·NaCl盐析法提取长片段基因组DNA | 第100页 |
| ·短臂扩增与连接 | 第100-102页 |
| ·长臂扩增与连接 | 第102页 |
| ·打靶载体的线性化 | 第102-105页 |
| 4 结果与分析 | 第105-110页 |
| ·PCR扩增用的DNA模板 | 第105页 |
| ·打靶载体的构建 | 第105-110页 |
| ·短臂的酶切鉴定 | 第105-107页 |
| ·长臂的扩增、克隆及酶切鉴定 | 第107页 |
| ·打靶载体PLS-pPNT的酶切鉴定 | 第107-110页 |
| 5 讨论 | 第110-113页 |
| ·长片段DNA的克隆与酶切连接问题 | 第110-111页 |
| ·基因打靶载体构建的理论分析 | 第111-113页 |
| 6 小结 | 第113-114页 |
| ·已经获得的结果 | 第113页 |
| ·本研究的创新点与特色 | 第113页 |
| ·本研究的不足之处 | 第113页 |
| ·关于本研究后续实验的建议 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-123页 |
| 附录1 缩略词表 | 第123-124页 |
| 附录2 主要性状的中英文对照和缩写 | 第124-125页 |
| 附录3 在读期间发表论文题录 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126页 |