| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-29页 |
| 1 油菜杂种优势与利用 | 第10-16页 |
| ·油菜杂种优势利用的途径 | 第11页 |
| ·油菜细胞核雄性不育的研究 | 第11-16页 |
| ·油菜细胞核雄性不育材料的来源 | 第11-12页 |
| ·油菜细胞核雄性不育的类型 | 第12-13页 |
| ·油菜细胞核雄性不育的细胞学研究 | 第13-14页 |
| ·油菜细胞核雄性不育的遗传机制及分子机理 | 第14-16页 |
| ·油菜细胞核雄性不育的遗传机制 | 第14-15页 |
| ·油菜细胞核雄性不育的分子机理 | 第15-16页 |
| 2 植物差异表达基因克隆技术及研究进展 | 第16-22页 |
| ·mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) | 第17页 |
| ·cDNA代表性差异分析(RDA) | 第17-18页 |
| ·抑制性差减杂交 | 第18页 |
| ·cDNA-AFLP | 第18页 |
| ·基因表达系列分析(SAGE) | 第18-19页 |
| ·cDNA芯片技术(cDNA microarray) | 第19-20页 |
| ·本研究所用抑制性消减杂交方法原理与技术介绍 | 第20-22页 |
| ·SSH主要技术过程 | 第20-22页 |
| ·SSH优缺点评价 | 第22页 |
| 3 均一化文库构建技术的发展及其应用 | 第22-27页 |
| ·复性式均一化技术 | 第23-24页 |
| ·与基因组饱和杂交法 | 第24-27页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第27-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-46页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-31页 |
| ·取材 | 第29页 |
| ·提取总RNA和纯化mRNA的方法 | 第29-31页 |
| ·提取总RNA | 第29-30页 |
| ·纯化mRNA | 第30-31页 |
| ·SSH差减文库的构建 | 第31-37页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第31页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第31-32页 |
| ·用RsaI酶消化cDNA | 第32页 |
| ·接头连接 | 第32-33页 |
| ·第一次杂交 | 第33页 |
| ·第二次杂交 | 第33页 |
| ·第一次PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·第二次PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·差减效率的PCR检测 | 第35页 |
| ·差减片段与载体的连接 | 第35-36页 |
| ·连接产物转化(以下操作均在无菌环境下进行) | 第36页 |
| ·差减文库插入片断长度检测 | 第36-37页 |
| ·均一化文库的构建 | 第37-46页 |
| ·合成双链cDNA | 第37-39页 |
| ·合成cDNA第一链 | 第37-38页 |
| ·cDNA扩增(LD-PCR) | 第38-39页 |
| ·准备DSN Solution | 第39页 |
| ·杂交(hybridization) | 第39页 |
| ·cDNA的均一化 | 第39-40页 |
| ·均一化cDNA的第一次扩增 | 第40-41页 |
| ·均一化cDNA的第二次扩增 | 第41-42页 |
| ·均一化cDNA(第二次扩增后)与载体连接 | 第42页 |
| ·连接产物转化 | 第42页 |
| ·均一化文库插入片断长度检测 | 第42页 |
| ·cDNA均一化效果分析 | 第42-46页 |
| ·虚拟Northern blot(Virtual Northern blot) | 第42-45页 |
| ·测序 | 第45-46页 |
| 第三章 结果与分析 | 第46-57页 |
| ·总RNA含量和质量的检测 | 第46页 |
| ·mRNA的质量检测 | 第46-47页 |
| ·SSH文库的构建及质量检测 | 第47-50页 |
| ·cDNA合成与酶切 | 第47-48页 |
| ·差减效率检测 | 第48-49页 |
| ·差减产物克隆 | 第49-50页 |
| ·均一化文库的构建及质量检测 | 第50-57页 |
| ·cDNA的合成 | 第50-51页 |
| ·均一化cDNA的第一次扩增 | 第51页 |
| ·均一化cDNA的第二次扩增 | 第51-52页 |
| ·克隆数目和重组率的鉴定 | 第52页 |
| ·插入片断长度的检测 | 第52-53页 |
| ·均一化cDNA文库的均一化效果分析 | 第53-57页 |
| ·虚拟Northern blot | 第53页 |
| ·测序 | 第53-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-60页 |
| ·RNA的提取和mRNA的纯化 | 第57页 |
| ·抑制性差减杂交分离差异表达基因的有效性 | 第57页 |
| ·均一化方法的评价 | 第57-60页 |
| ·两种主要均一化方法特点分析 | 第57-58页 |
| ·DSN法与其它均一化方法的比较 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67页 |