| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 文献回顾 | 第13-20页 |
| ·小反刍兽疫病毒及其H 蛋白综述 | 第13-14页 |
| ·杆状病毒表达系统综述 | 第14-19页 |
| ·家蚕/ BmNPV 表达系统 | 第14-16页 |
| ·Bac-to-Bac 系统 | 第16-18页 |
| ·杆状病毒表面展示系统 | 第18-19页 |
| ·展望 | 第19-20页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第20-23页 |
| ·研究目的和意义 | 第20页 |
| ·研究内容 | 第20-22页 |
| ·实验流程 | 第22-23页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第23-27页 |
| ·生物信息学工具 | 第23页 |
| ·方法 | 第23页 |
| ·结果 | 第23-26页 |
| ·PPRV H 蛋白生物信息学分析结果 | 第23-25页 |
| ·GP64 生物信息学分析结果 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| 第四章 pFastBac 1-SHT 重组质粒的构建 | 第27-40页 |
| ·材料与试剂 | 第27-29页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27-29页 |
| ·方法 | 第29-36页 |
| ·pBad/Thio-T0P0-PPRV H 质粒扩增 | 第29-30页 |
| ·碱裂解法制备小量质粒 | 第30-31页 |
| ·目的基因的扩增 | 第31-34页 |
| ·PCR 产物和pFastBac 1 载体的双酶切 | 第34页 |
| ·连接反应 | 第34-35页 |
| ·E. coli TG1 感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-39页 |
| ·PPRV H 基因扩增 | 第36页 |
| ·跨膜序列扩增 | 第36-37页 |
| ·PPRV H 基因与gp64 跨膜序列的PCR 连接与扩增 | 第37页 |
| ·信号肽-PPRV H-跨膜序列扩增 | 第37-38页 |
| ·pFastBac 1-SHT 重组质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第五章 重组病毒Bacmid-SHT 的获得与鉴定 | 第40-53页 |
| ·材料与试剂 | 第40-42页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40-42页 |
| ·方法 | 第42-49页 |
| ·E. coli DH10Bac 感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·重组质粒转化E. coli DH10Bac 菌株 | 第42页 |
| ·挑取单克隆 | 第42页 |
| ·重组Bacmid 的小量制备 | 第42-43页 |
| ·重组Bacmid PCR 鉴定 | 第43-45页 |
| ·细胞复苏 | 第45页 |
| ·细胞冻存 | 第45页 |
| ·重组Bacmid-SHT 与脂质体转染BmN 细胞 | 第45-46页 |
| ·病毒扩增 | 第46页 |
| ·重组Bacmid-SHT 在Bm N 细胞中的表达分析 | 第46-49页 |
| ·结果 | 第49-52页 |
| ·E. coli DH10Bac 中重组Bacmid-SHT PCR 鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组Bacmid-SHT 转染细胞 | 第50页 |
| ·逆转录PCR 结果 | 第50-51页 |
| ·SDS-PAGE 电泳图 | 第51页 |
| ·Western blotting 检测 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第六章 PPRV H 蛋白在蚕蛹中的表达检测 | 第53-59页 |
| ·材料与试剂 | 第53页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·试剂的配制 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·重组病毒接种蚕蛹 | 第53-54页 |
| ·重组病毒基因PCR 鉴定 | 第54-55页 |
| ·转录水平检测目的基因的表达 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-57页 |
| ·重组Bm NPV-SHT PCR 鉴定 | 第56页 |
| ·逆转录PCR 结果 | 第56-57页 |
| ·Western blotting 检测 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第七章 重组杆状病毒的免疫原性研究 | 第59-66页 |
| ·试剂与材料 | 第59-60页 |
| ·方法 | 第60-63页 |
| ·病毒纯化 | 第60页 |
| ·免疫小鼠 | 第60-61页 |
| ·抗体的效价测定 | 第61页 |
| ·血清中和实验检测重组BmNPV-SHT 免疫原性 | 第61-62页 |
| ·淋巴细胞增殖实验检测重组BmNPV-SHT 免疫原性 | 第62-63页 |
| ·结果 | 第63-64页 |
| ·抗体效价测定 | 第63页 |
| ·血清中和实验 | 第63页 |
| ·淋巴细胞增殖实验 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
