| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-17页 |
| ·纤维素酶研究综述 | 第10-15页 |
| ·纤维素酶的结构、种类及作用机理 | 第10-11页 |
| ·纤维素酶的基因克隆 | 第11-13页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第14-15页 |
| ·大肠杆菌表达系统研究进展 | 第15页 |
| ·大肠杆菌表达系统的优点 | 第15页 |
| ·影响外源基因在大肠杆菌中表达的因素 | 第15页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第15-17页 |
| ·巴斯德毕赤酵母酵母系统的优点 | 第15-16页 |
| ·影响外源基因在毕赤酵母系统中表达的因素 | 第16-17页 |
| 2 材料 | 第17-22页 |
| ·载体与菌株 | 第17-19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·内切葡聚糖酶活力测定溶液 | 第20页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第20-21页 |
| ·常用缓冲液 | 第21-22页 |
| ·缓冲液1×TSS的配制 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE电泳缓冲液及试剂 | 第21-22页 |
| 3 方法 | 第22-32页 |
| ·米曲霉giF-10内切葡聚糖酶基因的克隆及序列分析 | 第22-26页 |
| ·米曲霉giF-10内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第23页 |
| ·T克隆 | 第23-25页 |
| ·含eg基因质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·内切葡聚糖酶基因eg的序列分析 | 第26页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第26-28页 |
| ·引入酶切位点的eg基因的高保真酶扩增 | 第26页 |
| ·含eg基因质粒的提取 | 第26-28页 |
| ·含内切葡聚糖酶基因的质粒双酶切 | 第26-27页 |
| ·回收酶切后的内切葡聚糖酶基因 | 第27页 |
| ·表达载体的准备 | 第27页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·阳性菌落鉴定 | 第27页 |
| ·重组表达载体的转化 | 第27-28页 |
| ·诱导表达 | 第28页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达 | 第28-31页 |
| ·引入酶切位点的eg基因的克隆 | 第28页 |
| ·含eg基因质粒的提取 | 第28页 |
| ·含内切葡聚糖酶基因的质粒双酶切 | 第28页 |
| ·回收酶切后的内切葡聚糖酶基因 | 第28-29页 |
| ·表达载体的准备 | 第29页 |
| ·连接 | 第29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·阳性菌落鉴定 | 第29页 |
| ·毕赤酵母重组表达载体的电击转化 | 第29-30页 |
| ·高效表达菌株筛选 | 第30页 |
| ·重组酵母表达条件的优化 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE | 第31页 |
| ·原始酶及重组酶的酶学性质分析 | 第31-32页 |
| ·原始酶与重酶最适温度的测定 | 第31-32页 |
| ·原始酶与重组酶温度稳定性的测定 | 第32页 |
| ·原始酶与重组酶最适pH的测定 | 第32页 |
| ·原始酶与重组酶pH稳定性的测定 | 第32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-49页 |
| ·内切葡聚糖酶基因eg的克隆、DNA测序和生物信息学分析 | 第32-38页 |
| ·内气葡聚糖酶eg基因的扩增 | 第32-33页 |
| ·DNA测序分析 | 第33-35页 |
| ·生物信息学分析 | 第35-38页 |
| ·内切葡聚糖酶基因eg的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第38-40页 |
| ·大肠杆菌中表达eg基因的扩增 | 第38页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pET32a-eg的鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒的转化及阳性转化子的筛选 | 第39-40页 |
| ·刚果红平板初筛 | 第40页 |
| ·内切葡聚糖酶基因eg的克隆及在毕赤酵母中的表达 | 第40-46页 |
| ·毕赤酵母表达eg基因的扩增 | 第40-41页 |
| ·酵母重组表达阳性菌的构建 | 第41页 |
| ·重组质粒pPICZαA-eg的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒电转酵母X33并筛选酶活较高的转化子 | 第42-43页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| ·重组酵母表达条件的优化 | 第44-46页 |
| ·原始酶及酵母表达重组酶的酶学性质分析 | 第46-49页 |
| ·原始酶与重组酶最适温度的测定 | 第46-47页 |
| ·原始酶与重组酶温度稳定性的测定 | 第47-48页 |
| ·原始酶与重组酶最适pH的测定 | 第48页 |
| ·原始酶与重组酶pH稳定性的测定 | 第48-49页 |
| 5 讨论 | 第49-52页 |
| ·大肠杆菌表达研究 | 第49-50页 |
| ·毕赤酵母表达研究 | 第50-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |