| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-24页 |
| 1 青贮与青贮剂 | 第10-17页 |
| 1．1 青贮 | 第10-13页 |
| 1．1．1 青贮特点 | 第10-11页 |
| 1．1．2 青贮过程 | 第11-12页 |
| 1．1．3 青贮中的微生物 | 第12-13页 |
| 1．2 青贮添加剂 | 第13-17页 |
| 1．2．1 细菌接种剂 | 第14-15页 |
| 1．2．2 酶制剂 | 第15-16页 |
| 1．2．3 细菌与酶联合制剂 | 第16-17页 |
| 1．2．4 非蛋白氮和防腐剂 | 第17页 |
| 2 转基因乳酸菌 | 第17-22页 |
| 2．1 乳酸菌 | 第17-18页 |
| 2．2 转基因乳酸菌 | 第18-20页 |
| 2．3 纤维素酶在乳酸菌中的表达 | 第20-22页 |
| 3 本论文的研究意义和研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 纤维素酶在乳酸菌中的表达 | 第24-39页 |
| 1 材料与方法 | 第24-31页 |
| 1．1 材料 | 第24-26页 |
| 1．1．1 菌株与载体 | 第24页 |
| 1．1．2 培养基 | 第24页 |
| 1．1．3 内切酶与试剂 | 第24-26页 |
| 1．1．4 主要仪器 | 第26页 |
| 1．2 方法 | 第26-31页 |
| 1．2．1 大肠杆菌质粒的抽提 | 第27页 |
| 1．2．2 乳酸菌质粒的抽提 | 第27页 |
| 1．2．3 质粒纯化 | 第27-28页 |
| 1．2．4 限制性内切酶酶切 | 第28页 |
| 1．2．5 水平式琼脂糖凝胶电泳检测 | 第28-29页 |
| 1．2．6 DNA片段的回收与纯化 | 第29页 |
| 1．2．7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 1．2．8 乳酸菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 1．2．9 目的 DNA片段的连接 | 第29-30页 |
| 1．2．10 转化大肠杆菌 | 第30页 |
| 1．2．11 电转化乳酸菌 | 第30页 |
| 1．2．12 刚果红法筛选阳性克隆 | 第30页 |
| 1．2．13 重组菌的IPTG诱导表达 | 第30-31页 |
| 1．2．14 胞外、胞内和周质空间中酶活的测定(DNS法) | 第31页 |
| 1．2．15 胞外、胞内和周质空间中酶活的测定(Somogy法) | 第31页 |
| 2 结果与讨论 | 第31-38页 |
| 2．1 纤维素酶基因的获得 | 第31-32页 |
| 2．2 重组质粒pTRKH_2-cel、pTRKL_2-cel的构建 | 第32-33页 |
| 2．3 大肠杆菌重组子的酶活测定 | 第33-35页 |
| 2．4 乳酸乳球菌重组子的获得 | 第35-36页 |
| 2．5 重组质粒Pmg36e-cel的构建及其重组子的获得 | 第36-37页 |
| 2．6 乳酸乳球菌重组子的酶活测定 | 第37-38页 |
| 3 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 乳酸乳球菌的电转化条件 | 第39-45页 |
| 1 材料与方法 | 第39-40页 |
| 1．1 材料 | 第39页 |
| 1．1．1 菌株与质粒 | 第39页 |
| 1．1．2 培养基与缓冲液 | 第39页 |
| 1．1．3 主要仪器 | 第39页 |
| 1．2 方法 | 第39-40页 |
| 1．2．1 细胞的制备 | 第39页 |
| 1．2．2 电转化 | 第39-40页 |
| 2 结果与讨论 | 第40-43页 |
| 2．1 电场强度对转化效率的影响 | 第40页 |
| 2．2 电阻大小对转化效率的影响 | 第40-41页 |
| 2．3 细胞生长时期对转化效率的影响 | 第41-42页 |
| 2．4 细胞复苏时间对转化效率的影响 | 第42-43页 |
| 2．5 其它因素对转化效率的影响 | 第43页 |
| 2．5．1 质粒DNA浓度 | 第43页 |
| 2．5．2 抗生素浓度 | 第43页 |
| 2．5．3 电转化杯使用次数 | 第43页 |
| 3 小结 | 第43-45页 |
| 第四章 乳酸菌和纤维素酶在青贮中的作用 | 第45-55页 |
| 1 材料与方法 | 第45-47页 |
| 1．1 材料 | 第45-46页 |
| 1．1．1 青贮饲料 | 第45页 |
| 1．1．2 添加剂 | 第45页 |
| 1．1．3 培养基 | 第45页 |
| 1．1．4 主要仪器 | 第45-46页 |
| 1．2 方法 | 第46-47页 |
| 1．2．1 饲料制备方法 | 第46页 |
| 1．2．2 贮藏方法 | 第46页 |
| 1．2．3 检测方法 | 第46-47页 |
| 2 结果与讨论 | 第47-53页 |
| 2．1 pH值变化 | 第47-48页 |
| 2．2 还原糖变化 | 第48-49页 |
| 2．3 纤维素酶酶活变化 | 第49-51页 |
| 2．4 乳酸变化 | 第51-52页 |
| 2．5 乳酸菌活菌数变化 | 第52-53页 |
| 3 小结 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
