| Part Ⅰ | 第1-23页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第8页 |
| 1 HIV简介 | 第8-9页 |
| 2 HIV-1基因组结构及功能 | 第9-10页 |
| 3 HIV-1 pol基因编码产物功能及相互作用 | 第10-11页 |
| 4 HIV-1 pol特异的抗原表位 | 第11页 |
| 5 HIV-1 pol作为抗原在HIV-1检测与治疗中的作用与地位 | 第11-12页 |
| 6 本研究的内容、目的与意义 | 第12-13页 |
| 材料与方法 | 第13页 |
| 1 实验材料 | 第13-14页 |
| ·菌株与质粒 | 第13页 |
| ·工具酶和主要生化试剂 | 第13页 |
| ·试剂盒 | 第13页 |
| ·主要仪器 | 第13-14页 |
| ·引物和抗体 | 第14页 |
| 2 方法 | 第14-16页 |
| ·目的基因扩增、克隆及测序 | 第14页 |
| ·表达载体的构建 | 第14页 |
| ·细菌的培养和诱导表达 | 第14页 |
| ·重组蛋白免疫印迹法鉴定 | 第14页 |
| ·包涵体的分离、提纯 | 第14-15页 |
| ·包涵体的复性 | 第15页 |
| ·包涵体复性后的纯化 | 第15-16页 |
| 3 结果与分析 | 第16-19页 |
| ·目的基因扩增 | 第16页 |
| ·表达载体鉴定 | 第16-17页 |
| ·重组蛋白P66和P51的表达 | 第17页 |
| ·重组蛋白P66和P51的免疫印迹 | 第17页 |
| ·重组蛋白P66和P51的复性与纯化 | 第17-19页 |
| 4 讨论 | 第19-20页 |
| 5 小结 | 第20-21页 |
| 6 参考文献 | 第21-23页 |
| Part Ⅱ | 第23-61页 |
| 摘要 | 第23-25页 |
| Abstract | 第25-28页 |
| 前言 | 第28页 |
| 1 DNA疫苗的特点 | 第28页 |
| 2 DNA疫苗的免疫机制 | 第28-30页 |
| 3 免疫佐剂在DNA疫苗中的应用 | 第30-31页 |
| 4 IL-12与IL-23的研究进展 | 第31-36页 |
| ·IL-12结构与功能概述与研究进展 | 第31-33页 |
| ·IL-23结构与功能概述与研究进展 | 第33-36页 |
| 5 本研究的内容、目的及意义 | 第36-38页 |
| 材料和方法 | 第38页 |
| 1 材料 | 第38-41页 |
| ·工具酶 | 第38页 |
| ·试剂盒 | 第38页 |
| ·质粒和菌株 | 第38页 |
| ·主要生化试剂 | 第38页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·常用溶液配方 | 第39-40页 |
| ·引物 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-51页 |
| ·mIL-12和mIL-23 cDNA的扩增 | 第41-44页 |
| ·p40、p35、p19 mRNA逆转录 | 第41-42页 |
| ·Nest-PCR法扩增目的基因p40，p35，p19的cDNA | 第42-44页 |
| ·mIL-12和mIL-23的TA克隆与测序 | 第44页 |
| ·mIL-12和mIL-23单亚基真核表达载体的构建 | 第44页 |
| ·mIL-12和mIL-23双亚基真核表达载体的构建 | 第44页 |
| ·p40、p35、p19基因终止突变及突变克隆的构建 | 第44页 |
| ·p40、p35、p19基因终止突变 | 第44页 |
| ·突变克隆的构建 | 第44页 |
| ·mIL-12和mIL-23在2937细胞中的表达 | 第44-45页 |
| ·细胞培养 | 第44-45页 |
| ·质粒转染 | 第45页 |
| ·Western blot测IL-12和IL-23在293T细胞中的表达 | 第45页 |
| ·免疫质粒的大量提取 | 第45页 |
| ·动物实验 | 第45-46页 |
| ·动物实验分组 | 第46页 |
| ·动物免疫方案 | 第46页 |
| ·免疫指标检测 | 第46-51页 |
| ·小鼠的处理(小鼠脾淋巴细胞的制备) | 第46-47页 |
| ·流式细胞仪测IFN-γ胞内分泌 | 第47-48页 |
| ·细胞处理 | 第47-48页 |
| ·细胞染色 | 第48页 |
| ·ELISPOT测IFN-γ胞内分泌 | 第48-51页 |
| ·包板 | 第48-49页 |
| ·细胞处理 | 第49-50页 |
| ·转板处理 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-54页 |
| ·mIL-12和mIL-23 cDNA的扩增 | 第51页 |
| ·mIL-12和mIL-23的TA克隆与测序 | 第51-52页 |
| ·mIL-12和mIL-23单亚基真核表达载体的构建 | 第52页 |
| ·mIL-12和mIL-23双亚基真核表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·mIL-12和mIL-23在293T细胞中的表达 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 5 小结 | 第56-57页 |
| 6 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-100页 |
| 1 HIV-1 pol p66 sequence | 第62页 |
| 2 HIV-1 pol p51 sequence | 第62-63页 |
| 3 mIL-12 p40 sequence | 第63-64页 |
| 4 mIL-12 p40 mut sequence | 第64页 |
| 5 mIL-12 p35 sequence | 第64页 |
| 6 mIL-12 p35 mut sequence | 第64-65页 |
| 7 mIL-23 p19 sequence | 第65页 |
| 8 mIL-23 p19 mut sequence | 第65页 |
| 9 pDRSV1.0 sequence | 第65-68页 |
| 10 pDRSV40 sequence | 第68-70页 |
| 11 pDRSV40 mut sequence | 第70-73页 |
| 12 pDRSV35 sequence | 第73-75页 |
| 13 pDRSV19 sequence | 第75-78页 |
| 14 pDRSV19 mut sequence | 第78-80页 |
| 15 pDRSV3540 sequence | 第80-84页 |
| 16 pDRSV1940 sequence | 第84-88页 |
| 17 pDRSV19~+40~- sequence | 第88-92页 |
| 18 pDRSV19~-40~+ sequence | 第92-95页 |
| 19 pDRSV19~-40~- sequence | 第95-100页 |
| 缩略词表 | 第100页 |
