大菱鲆（Scophthalmus maximus）病毒性出血病病毒基因克隆及序列分析
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 0 前言 | 第10-12页 |
| 1 鱼类虹彩病毒研究进展 | 第12-21页 |
| 2 病毒的提纯、定量和初步SDS-PAGE分析 | 第21-27页 |
| ·材料和方法 | 第21-22页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·病料 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-22页 |
| ·病毒的提取和纯化 | 第21页 |
| ·纯化病毒浓度的测定 | 第21-22页 |
| ·病毒的初步SDS-PAGE分析 | 第22页 |
| ·结果和分析 | 第22-25页 |
| ·病毒的提纯 | 第22-23页 |
| ·病毒的定量 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| 3 PCR方法检测患病鱼中的病毒 | 第27-36页 |
| ·材料和方法 | 第27-29页 |
| ·材料和设备 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-29页 |
| ·引物序列的设计 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR反应产物的电泳 | 第29页 |
| ·PCR产物的TA克隆和序列测定 | 第29页 |
| ·结果和分析 | 第29-34页 |
| ·设计的引物 | 第29-33页 |
| ·PCR的结果 | 第33页 |
| ·PCR产物的测序结果 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 4 病毒基因组DNA的制备和初步酶分析 | 第36-45页 |
| ·材料和方法 | 第36-38页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·病毒材料 | 第36页 |
| ·酶及生化试剂 | 第36页 |
| ·仪器设备 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-38页 |
| ·病毒核酸的提取和纯化 | 第36-37页 |
| ·核酸的初步鉴定 | 第37页 |
| ·病毒DNA的限制性内切酶消化 | 第37页 |
| ·内切酶图谱的分析和核酸分子量的初步计算 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-42页 |
| ·病毒DNA的抽提 | 第38页 |
| ·病毒核酸的初步鉴定 | 第38-39页 |
| ·病毒DNA的限制性内切酶图谱 | 第39-40页 |
| ·病毒DNA Pst Ⅰ酶切图谱分析 | 第40页 |
| ·病毒DNA分子量的计算 | 第40-41页 |
| ·酶切图谱的比较 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| 5 病毒的部分基因文库的构建和部分序列的分析 | 第45-66页 |
| ·材料和方法 | 第45-49页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·病毒DNA的处理 | 第45页 |
| ·pBluescriptⅡ KS质粒的制备 | 第45-46页 |
| ·质粒DNA的酶切和去磷酸化 | 第46-47页 |
| ·质粒和外源DNA片段的连接 | 第47页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| ·化学转化法转化 | 第48页 |
| ·PCR方法鉴定阳性克隆 | 第48页 |
| ·酶切鉴定插片段 | 第48-49页 |
| ·克隆片段的DNA序列测定 | 第49页 |
| ·序列分析 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-63页 |
| ·物理方法处理的DNA片段 | 第49-50页 |
| ·酶切处理的质粒DNA | 第50页 |
| ·感受态大肠杆菌的转化效率 | 第50页 |
| ·PCR方法鉴定阳性克隆结果 | 第50-52页 |
| ·提取质粒鉴定阳性克隆 | 第52页 |
| ·序列测定结果 | 第52-56页 |
| ·序列分析结果 | 第56-63页 |
| ·几种不同虹彩病毒的遗传距离分析 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| 6 PCR、点杂交法和原位杂交 | 第66-75页 |
| ·材料和方法 | 第66-72页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-72页 |
| ·PCR引物的设计 | 第66页 |
| ·PCR反应条件的优化及PCR反应 | 第66-67页 |
| ·PCR方法合成地高辛标记的核酸探针 | 第67-68页 |
| ·地高辛标记的核酸探针产量的测定 | 第68页 |
| ·点杂交 | 第68-70页 |
| ·原位杂交 | 第70-72页 |
| ·结果和分析 | 第72-73页 |
| ·设计的核酸探针引物的分析结果 | 第72页 |
| ·温度梯度PCR | 第72页 |
| ·PCR结果 | 第72-73页 |
| ·核酸探针的合成和产量 | 第73页 |
| ·点杂交结果 | 第73页 |
| ·原位杂交 | 第73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| 7 小结 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 附录一 | 第81-86页 |
| 附录二 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
