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疫病(Phytophthora cinnamomi)pg基因的克隆、测序及其遗传转化研究

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-11页
1 文献综述第11-30页
   ·疫霉属病原菌的分类、寄主范围及其侵染循环第11-16页
   ·病原菌PG的分子生物学研究第16-20页
     ·PG基因的种类第16-19页
       ·曲霉菌(Aspergillus) PG第16-18页
       ·灰霉菌(Botrytis cinerea) PG第18页
       ·镰孢菌(Fusarium spp)的PG第18页
       ·其它真菌的PG第18-19页
     ·PG基因的结构与功能第19页
     ·表达与调空第19-20页
   ·植物PG的结构、功能及表达调控第20-26页
     ·植物PG的作用方式和组织定位第20-21页
     ·植物PG同工酶第21页
     ·PG结构及序列的差异性第21-22页
     ·PG功能的多样性第22-24页
       ·PG与果实颜色第22页
       ·PG与果胶的降解第22-23页
       ·PG与器官脱落第23-24页
       ·PG与花粉授粉第24页
     ·PG基因的表达调控第24-25页
     ·PG和乙烯与果实成熟关系的新观点第25-26页
   ·PG抑制蛋白--PGIP的研究进展第26-30页
     ·PGIP的含量、分布的差异与植物抗性强弱的关系第27-28页
       ·植株不同发育时期PGIP的含量与其抗病性第27页
       ·PGIP在植物不同器官和组织内的分布第27-28页
       ·PGIP对病原菌的抑制程度第28页
     ·PGIP在植物抗病中的作用第28-30页
       ·PGIP的生物学功能第28页
       ·PGIP参与植物局部和系统诱导抗性第28-30页
2 引言第30-32页
3 材料与方法第32-41页
   ·菌种与来源第32页
   ·樟疫霉菌和曲霉菌基因组DNA的提取第32页
   ·质粒DNA的提取与纯化第32-33页
   ·PCR反应第33-34页
     ·PCR引物设计与耐热聚合酶来源第33-34页
     ·PCR反应液组成第34页
     ·PCR反应条件第34页
   ·PCR产物的纯化与连接第34-35页
     ·PCR产物的纯化第34-35页
     ·连接与转化大肠杆菌第35页
   ·菌落PCR第35-36页
     ·大肠杆菌菌落PCR第35-36页
     ·酵母菌菌落PCR第36页
   ·酶切分析与测序第36-37页
   ·酵母菌的遗传转化与质粒DNA的提取第37-38页
     ·酵母菌的遗传转化第37-38页
     ·酵母菌质粒DNA的提取第38页
   ·蛋白质的分离与Western blotting第38-39页
     ·PG蛋白质的诱导与分离第38页
     ·Western blotting第38-39页
   ·PG活性的检测第39-40页
   ·PGs与PGIPs的相互作用第40-41页
     ·PGIPs表达载体的获得与遗传转化第40页
     ·PGs与PGIPs的相互作用第40-41页
4 结果与分析第41-66页
   ·pg基因表达载体的构建策略第41-49页
     ·Pcpg1基因表达载体的构建策略第41-42页
     ·Pcpg2和Pcpg4基因表达载体的构建策略第42-43页
     ·Pcpg6基因表达载体的构建策略第43-44页
     ·AnpgⅠ基因表达载体的构建策略第44-46页
     ·Pcpg7、Pcpg10和Pcpg19基因表达载体的构建策略第46-47页
     ·Pcpg12、Pcpg16和Pcpg17基因表达载体的构建策略第47-48页
     ·Pcpg9基因表达载体的构建策略第48页
     ·Ppgip基因表达载体的构建策略第48-49页
   ·pg基因与PPgip基因的克隆与测序第49-53页
     ·克隆Pg基因与PPgip基因的PCR条件的优化第49-50页
     ·大肠杆菌菌落PCR条件的优化第50-51页
     ·AnpgⅠ基因的克隆与测序第51-52页
     ·Pcpg1、Pcpg2和Pcpg4基因的克隆与测序第52页
     ·Pcpg6基因的克隆与测序第52页
     ·Pcpg7、Pcpg10和Pcpg19基因的克隆与测序第52-53页
     ·Pcpg9、Pcpg12、Pcpg16和Pcpg17基因的克隆与测序第53页
     ·PPgip基因的克隆与测序第53页
   ·PG基因的连接与检测第53-58页
     ·Pcpg1基因的连接与检测第53-54页
     ·Pcpg2、Pcpg4、Pcpg6和PPgip基因连接与检测第54-55页
     ·AnpgⅠ基因的连接与检测第55-56页
     ·Pcpg7、Pcpg10和Pcpg19基因的连接与检测第56-57页
     ·Pcpg9、Pcpg12、Pcpg16和Pcpg17基因的连接与检测第57-58页
   ·遗传转化与菌落PCR检测第58-61页
     ·酵母菌菌落PCR条件的优化第58页
     ·遗传转化与菌落PCR检测第58-61页
   ·转化PG基因系的Western blotting第61-62页
     ·PG蛋白质诱导适宜时间的确定第61-62页
     ·转化pg基因系的Western blotting第62页
   ·PG活性的检测第62-64页
   ·PG与PGIP相互作用的初步研究第64-66页
5 讨论第66-71页
   ·P.cinnamomi pg多基因家族的生物学意义第66-67页
   ·P.cinnamomi PGs的糖基化及其多样性第67-68页
   ·P.cinnamomi pg多基因家族的进化第68页
   ·基因克隆效率与菌落PCR技术第68-71页
结论第71-73页
致谢第73-74页
参考文献第74-85页
附表1第85-86页
附图1第86-87页
附图2第87-88页
附图3第88-89页
附图4第89-90页
附图5第90-92页
附图6第92-114页
 附图6-1第92-94页
 附图6-2第94-96页
 附图6-3第96-98页
 附图6-4第98-100页
 附图6-5第100-102页
 附图6-6第102-104页
 附图6-7第104-106页
 附图6-8第106-108页
 附图6-9第108-110页
 附图6-10第110-112页
 附图6-11第112-114页
附图7第114-116页
作者简介第116-117页

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