| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-16页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 材料和方法 | 第17-36页 |
| 1.材料部分 | 第17-24页 |
| 2.方法部分 | 第24-36页 |
| 第一部分 S.hygroscopicus 17997基因文库的建立 | 第36-45页 |
| 一、文库构建过程 | 第36-42页 |
| 1.载体Cosmid pKC505及其制备 | 第37页 |
| 2.S.hygroscopicus17997染色体DNA的制备及酶切 | 第37-42页 |
| 3.总DNA片段与pKC505的连接、包装及转染 | 第42页 |
| 二、基因文库质量分析 | 第42-45页 |
| 1.基因文库中粘粒重组率和基因组覆盖率 | 第42-43页 |
| 2.文库的重叠性和稳定性 | 第43-45页 |
| 第二部分 基因文库的杂交筛选及序列分析 | 第45-104页 |
| 一、Geldanamycin生物合成的推测和相关基因的克隆策略 | 第45-47页 |
| 二、基因文库筛选 | 第47-104页 |
| (一) AHBA生物合成相关基因的筛选 | 第47-59页 |
| 1.基因文库的初步筛选 | 第47页 |
| 2.文库的进一步筛选 | 第47-50页 |
| 3.外源片段的克隆及序列分析 | 第50-52页 |
| 4.AHBA合酶基因的筛选 | 第52-59页 |
| (二) S.hygroscopicus17997中PKS基因的克隆与分析 | 第59-63页 |
| 1.PKS基因的克隆 | 第59-61页 |
| 2.含PKS基因cosmids的筛选 | 第61-63页 |
| 小结： | 第63页 |
| (三) S.hygroscopicus17997中安莎类抗生素生物合成基因簇的克隆及序列分析 | 第63-104页 |
| 1.克隆AHBA合酶基因 | 第63-67页 |
| 3.基因文库筛选 | 第67-71页 |
| 3.克隆基因的序列分析 | 第71-104页 |
| 第三部分 S.hygroscopicus17997遗传转移系统的建立和克隆基因功能的鉴定 | 第104-132页 |
| 一、S.hygroscopicus17997对抗生素的敏感性研究 | 第104-106页 |
| (一) 固体平板法 | 第104-106页 |
| 1.不同培养基上S.hygroscopicus17997生长情况 | 第104-105页 |
| 2.S.hygroscopicus17997抗性研究 | 第105-106页 |
| (二) 液体培养法 | 第106页 |
| 二 噬菌体φC31衍生的KC515介导的遗传转移系统的建立 | 第106-114页 |
| (一) 噬菌体KC515对S.lividans1326及S.hygroscopicus17997侵染实验 | 第107-108页 |
| (二) KC515噬菌体的繁殖及DNA的提取 | 第108-111页 |
| 1.KC515的培养 | 第108-110页 |
| 2.制备高效价噬菌体原液及DNA快速鉴定 | 第110页 |
| 3.噬菌体DNA的提取 | 第110-111页 |
| (三) 重组噬菌体的构建 | 第111-114页 |
| 1.载体KC515的制备： | 第111页 |
| 2.外源克隆基因的制备、连接： | 第111-112页 |
| 3.PEG介导的噬菌体转染S.lividans1326原生质体及重组噬菌体的筛选 | 第112-114页 |
| 三、重组噬菌体对S.hygroscopicus17997的转染及Geldanamycin生物合成阻断株的筛选 | 第114-116页 |
| 四.生物合成阻断株发酵产物的HPLC鉴定及Southern证明 | 第116-132页 |
| (一) Southern杂交证明 | 第116-118页 |
| (二) 筛选菌株发酵产物的HPLC检测 | 第118-129页 |
| 1.Geldanamycin标准品的HPLC观察 | 第119-122页 |
| 2.各菌株发酵提取物HPLC检测 | 第122-129页 |
| (三) 发酵产物抗病毒活性检测 | 第129-132页 |
| 第四部分 生物合成基因簇的异源表达 | 第132-141页 |
| 1.S.lividans TK24转化子的获得 | 第132页 |
| 2.转化子的联合共培养结果分析 | 第132-141页 |
| 结论 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-144页 |
| 文献综述 | 第144-175页 |
| 一、AHBA生物合成途径的研究 | 第144-146页 |
| 二、聚酮体生物合成途径的研究 | 第146-149页 |
| 三、萘醌型安莎类抗生素生物合成基因簇的研究 | 第149-164页 |
| 1.rifamycin B | 第149-163页 |
| 2.Naphthomycin C | 第163-164页 |
| 四.苯醌型安莎类抗生素 | 第164-169页 |
| Ansatsienin A | 第164-169页 |
| 五、Mitomycin C | 第169页 |
| 六、Geldanamycin的研究进展 | 第169-175页 |
| 参考文献 | 第175-184页 |
| 攻读学位期间论文发表及获奖情况 | 第184-185页 |
| 致谢 | 第185-186页 |
