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热休克对牛卵母细胞和IVP胚胎影响的研究

中文摘要第1-7页
英文摘要(abstract)第7-8页
1 前言第8-20页
 1.1 胚胎发育第8-11页
  1.1.1 卵母细胞成熟第8-10页
  1.1.2 受精第10页
  1.1.3 胚胎发育第10-11页
 1.2 母体与胚胎基因的表达第11-12页
 1.3 早期卵裂胚胎的雌雄异形第12-13页
 1.4 热休克蛋白第13-17页
  1.4.1 Hsp70第13-14页
  1.4.2 Hsp70基因的转录调节第14页
  1.4.3 Hsp70功能第14-15页
  1.4.4 做为分子伴侣的hsp70第15页
  1.4.5 Hsp70——一种应激保护质第15-16页
  1.4.6 Hsp70——一种抗凋亡蛋白质第16页
  1.4.7 Hsp70——一种与微管相关的蛋白质。第16-17页
 1.5 热应激和生殖第17-18页
  1.5.1 胚胎对应激的应答第17-18页
 1.6 基本原理第18-20页
2 材料与方法第20-29页
 2.1 胚胎生产第20-21页
  2.1.1 卵母细胞的采集第20页
  2.1.2 卵母细胞体外成熟第20页
  2.1.3 输卵管细胞制备第20页
  2.1.4 精子制备第20-21页
  2.1.5 体外受精第21-89页
  2.1.6 共培养第0-21页
 2.2 热应激第21页
 2.3 发育率、性别比率和卵裂球定位第21-22页
  2.3.1 发育率第21页
  2.3.2 性别比率的判定第21-22页
  2.3.3 内细胞团和滋养外胚层鉴别染色第22页
  2.3.4 统计分析第22页
 2.4 RNA分离、反转录和PCR条件第22-26页
  2.4.1 卵母细胞和胚胎的生产第22-23页
  2.4.2 成熟卵母细胞和胚胎的收集第23页
  2.4.3 RNA提取第23页
  2.4.4 RNA沉淀和DNase处理第23页
  2.4.5 反转录第23-24页
  2.4.6 PCR条件第24页
  2.4.7 Hsp70的半定量分析第24-26页
  2.4.8 PCR产物的纯化和测序第26页
  2.4.9 数据分析第26页
 2.5 卵母细胞和胚胎中的hsp70第26-29页
  2.5.1 卵母细胞和胚胎的制备第26页
  2.5.2 凝胶电泳第26页
  2.5.3 蛋白质印变分析第26-27页
  2.5.4 共焦激光扫描电镜检查第27页
   2.5.4.1 卵母细胞第27页
   2.5.4.2 体外培养的八细胞胚第27页
   2.5.4.3 体内培养的八细胎胚第27页
  2.5.5 免疫细胞化学第27-28页
  2.5.6 封固第28页
  2.5.7 共焦图像分析第28-29页
3 结果第29-45页
 3.1 卵裂率和发育率第29-30页
 3.2 9日龄囊胚的性别比例第30-33页
 3.3 分化染色第33页
 3.4 Hsp70的半量RT-PCR分析第33-39页
 3.5 Western的杂交分析第39-40页
 3.6 共焦分析第40页
 3.7 卵母细胞第40-42页
 3.8 8-细胞胚胎第42-45页
4 讨论第45-56页
 4.1 发育速度第45-46页
 4.2 性别比率第46-48页
 4.3 卵母细胞和胚胎中hsp70的表达第48-51页
  4.3.1 数量测定第48-49页
  4.3.2 特异性第49页
  4.3.3 卵母细胞和胚胎中hsp70的转录第49-51页
 4.4 共焦激光扫描显微镜检查第51-56页
  4.4.1 hsp70抗体的特异性第51页
  4.4.2 卵母细胞第51-53页
  4.4.3 胚胎第53-56页
   4.4.3.1 体内和体外培养的八细胞胚第53-54页
   4.4.3.2 胚胎对热应激应答第54页
   4.4.3.3 hsp70在胚胎存活中的作用第54-56页
5 结论第56-57页
6 参考文献第57-72页
附录Ⅰ第72-74页
附录Ⅱ第74-77页
附录Ⅲ第77-78页
附录Ⅳ第78-79页
附录Ⅴ第79-88页
附录Ⅵ第88-89页
致谢第89页

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