中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要(abstract) | 第7-8页 |
1 前言 | 第8-20页 |
1.1 胚胎发育 | 第8-11页 |
1.1.1 卵母细胞成熟 | 第8-10页 |
1.1.2 受精 | 第10页 |
1.1.3 胚胎发育 | 第10-11页 |
1.2 母体与胚胎基因的表达 | 第11-12页 |
1.3 早期卵裂胚胎的雌雄异形 | 第12-13页 |
1.4 热休克蛋白 | 第13-17页 |
1.4.1 Hsp70 | 第13-14页 |
1.4.2 Hsp70基因的转录调节 | 第14页 |
1.4.3 Hsp70功能 | 第14-15页 |
1.4.4 做为分子伴侣的hsp70 | 第15页 |
1.4.5 Hsp70——一种应激保护质 | 第15-16页 |
1.4.6 Hsp70——一种抗凋亡蛋白质 | 第16页 |
1.4.7 Hsp70——一种与微管相关的蛋白质。 | 第16-17页 |
1.5 热应激和生殖 | 第17-18页 |
1.5.1 胚胎对应激的应答 | 第17-18页 |
1.6 基本原理 | 第18-20页 |
2 材料与方法 | 第20-29页 |
2.1 胚胎生产 | 第20-21页 |
2.1.1 卵母细胞的采集 | 第20页 |
2.1.2 卵母细胞体外成熟 | 第20页 |
2.1.3 输卵管细胞制备 | 第20页 |
2.1.4 精子制备 | 第20-21页 |
2.1.5 体外受精 | 第21-89页 |
2.1.6 共培养 | 第0-21页 |
2.2 热应激 | 第21页 |
2.3 发育率、性别比率和卵裂球定位 | 第21-22页 |
2.3.1 发育率 | 第21页 |
2.3.2 性别比率的判定 | 第21-22页 |
2.3.3 内细胞团和滋养外胚层鉴别染色 | 第22页 |
2.3.4 统计分析 | 第22页 |
2.4 RNA分离、反转录和PCR条件 | 第22-26页 |
2.4.1 卵母细胞和胚胎的生产 | 第22-23页 |
2.4.2 成熟卵母细胞和胚胎的收集 | 第23页 |
2.4.3 RNA提取 | 第23页 |
2.4.4 RNA沉淀和DNase处理 | 第23页 |
2.4.5 反转录 | 第23-24页 |
2.4.6 PCR条件 | 第24页 |
2.4.7 Hsp70的半定量分析 | 第24-26页 |
2.4.8 PCR产物的纯化和测序 | 第26页 |
2.4.9 数据分析 | 第26页 |
2.5 卵母细胞和胚胎中的hsp70 | 第26-29页 |
2.5.1 卵母细胞和胚胎的制备 | 第26页 |
2.5.2 凝胶电泳 | 第26页 |
2.5.3 蛋白质印变分析 | 第26-27页 |
2.5.4 共焦激光扫描电镜检查 | 第27页 |
2.5.4.1 卵母细胞 | 第27页 |
2.5.4.2 体外培养的八细胞胚 | 第27页 |
2.5.4.3 体内培养的八细胎胚 | 第27页 |
2.5.5 免疫细胞化学 | 第27-28页 |
2.5.6 封固 | 第28页 |
2.5.7 共焦图像分析 | 第28-29页 |
3 结果 | 第29-45页 |
3.1 卵裂率和发育率 | 第29-30页 |
3.2 9日龄囊胚的性别比例 | 第30-33页 |
3.3 分化染色 | 第33页 |
3.4 Hsp70的半量RT-PCR分析 | 第33-39页 |
3.5 Western的杂交分析 | 第39-40页 |
3.6 共焦分析 | 第40页 |
3.7 卵母细胞 | 第40-42页 |
3.8 8-细胞胚胎 | 第42-45页 |
4 讨论 | 第45-56页 |
4.1 发育速度 | 第45-46页 |
4.2 性别比率 | 第46-48页 |
4.3 卵母细胞和胚胎中hsp70的表达 | 第48-51页 |
4.3.1 数量测定 | 第48-49页 |
4.3.2 特异性 | 第49页 |
4.3.3 卵母细胞和胚胎中hsp70的转录 | 第49-51页 |
4.4 共焦激光扫描显微镜检查 | 第51-56页 |
4.4.1 hsp70抗体的特异性 | 第51页 |
4.4.2 卵母细胞 | 第51-53页 |
4.4.3 胚胎 | 第53-56页 |
4.4.3.1 体内和体外培养的八细胞胚 | 第53-54页 |
4.4.3.2 胚胎对热应激应答 | 第54页 |
4.4.3.3 hsp70在胚胎存活中的作用 | 第54-56页 |
5 结论 | 第56-57页 |
6 参考文献 | 第57-72页 |
附录Ⅰ | 第72-74页 |
附录Ⅱ | 第74-77页 |
附录Ⅲ | 第77-78页 |
附录Ⅳ | 第78-79页 |
附录Ⅴ | 第79-88页 |
附录Ⅵ | 第88-89页 |
致谢 | 第89页 |