中文摘要 | 第1-10页 |
英文摘要 | 第10-14页 |
1 前言 | 第14-16页 |
2 文献综述 | 第16-38页 |
2.1 植物遗传转化研究进展 | 第16-26页 |
2.1.1 转化方法 | 第17-20页 |
2.1.2 载体构建 | 第20-23页 |
2.1.3 受体材料的选择 | 第23-24页 |
2.1.4 影响转化的因素 | 第24-25页 |
2.1.5 转化体的筛选和鉴定 | 第25-26页 |
2.2 植物医药基因工程的研究进展 | 第26-33页 |
2.2.1 表达抗体 | 第28-30页 |
2.2.2 表达抗原 | 第30-32页 |
2.2.3 转化体系 | 第32-33页 |
2.3 马铃薯遗传转化的研究进展 | 第33-35页 |
2.4 禽流感病毒(H5N1)基因(h5n1a)及其疫苗的研究进展 | 第35-36页 |
2.5 植物医药基因工程的安全性问题 | 第36-38页 |
3 材料与方法 | 第38-54页 |
3.1 材料 | 第38-42页 |
3.1.1 植物材料 | 第38页 |
3.1.2 菌株与质粒 | 第38页 |
3.1.3 工具酶 | 第38-39页 |
3.1.4 主要化学试剂 | 第39页 |
3.1.5 主要仪器 | 第39页 |
3.1.6 主要溶液的配制 | 第39-41页 |
3.1.7 马铃薯组织培养中用到的培养基 | 第41-42页 |
3.2 方法 | 第42-54页 |
3.2.1 马铃薯再生系统的建立 | 第42页 |
3.2.2 植物双元表达载体的构建 | 第42-45页 |
3.2.3 双元质粒载体转化农杆菌 | 第45-46页 |
3.2.4 农杆菌转化子的鉴定 | 第46-47页 |
3.2.5 PCR扩增法制备生物素(地高辛)探针与纯化 | 第47-49页 |
3.2.6 基础抗性的测定、转化及转化体筛选 | 第49页 |
3.2.7 转化体的鉴定 | 第49-54页 |
4 结果与分析 | 第54-72页 |
4.1 马铃薯再生系统的优化 | 第54-56页 |
4.1.1 诱导分化 | 第54-55页 |
4.1.2 诱导结薯 | 第55-56页 |
4.2 转化方法的确定 | 第56页 |
4.3 载体的构建与鉴定 | 第56-60页 |
4.4 筛选剂的选择 | 第60-61页 |
4.5 转化条件的优化 | 第61-63页 |
4.5.1 菌株选择 | 第61页 |
4.5.2 条件筛选 | 第61-63页 |
4.6 转化体的筛选 | 第63-64页 |
4.7 整合表达检测 | 第64-71页 |
4.7.1 报告基因检测 | 第64-66页 |
4.7.2 目的基因PCR检测 | 第66页 |
4.7.3 DNA杂交检测 | 第66-70页 |
4.7.4 表达活性检测 | 第70-71页 |
4.8 小结 | 第71-72页 |
5 问题及讨论 | 第72-75页 |
5.1 取材问题 | 第72页 |
5.2 转化问题 | 第72-73页 |
5.3 转化体筛选问题 | 第73-74页 |
5.4 外源基因表达的检测问题 | 第74-75页 |
6 附录:乙型肝炎表面抗原基因(HbsAg-s)在马铃薯中的表达 | 第75-85页 |
参考文献 | 第85-97页 |
致谢 | 第97页 |