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禽流感病毒(H5N1)基因(h5n1a)在马铃薯中的转化与表达研究——附:乙肝表面抗原(HBsAg)基因转化的对比研究

中文摘要第1-10页
英文摘要第10-14页
1 前言第14-16页
2 文献综述第16-38页
 2.1 植物遗传转化研究进展第16-26页
  2.1.1 转化方法第17-20页
  2.1.2 载体构建第20-23页
  2.1.3 受体材料的选择第23-24页
  2.1.4 影响转化的因素第24-25页
  2.1.5 转化体的筛选和鉴定第25-26页
 2.2 植物医药基因工程的研究进展第26-33页
  2.2.1 表达抗体第28-30页
  2.2.2 表达抗原第30-32页
  2.2.3 转化体系第32-33页
 2.3 马铃薯遗传转化的研究进展第33-35页
 2.4 禽流感病毒(H5N1)基因(h5n1a)及其疫苗的研究进展第35-36页
 2.5 植物医药基因工程的安全性问题第36-38页
3 材料与方法第38-54页
 3.1 材料第38-42页
  3.1.1 植物材料第38页
  3.1.2 菌株与质粒第38页
  3.1.3 工具酶第38-39页
  3.1.4 主要化学试剂第39页
  3.1.5 主要仪器第39页
  3.1.6 主要溶液的配制第39-41页
  3.1.7 马铃薯组织培养中用到的培养基第41-42页
 3.2 方法第42-54页
  3.2.1 马铃薯再生系统的建立第42页
  3.2.2 植物双元表达载体的构建第42-45页
  3.2.3 双元质粒载体转化农杆菌第45-46页
  3.2.4 农杆菌转化子的鉴定第46-47页
  3.2.5 PCR扩增法制备生物素(地高辛)探针与纯化第47-49页
  3.2.6 基础抗性的测定、转化及转化体筛选第49页
  3.2.7 转化体的鉴定第49-54页
4 结果与分析第54-72页
 4.1 马铃薯再生系统的优化第54-56页
  4.1.1 诱导分化第54-55页
  4.1.2 诱导结薯第55-56页
 4.2 转化方法的确定第56页
 4.3 载体的构建与鉴定第56-60页
 4.4 筛选剂的选择第60-61页
 4.5 转化条件的优化第61-63页
  4.5.1 菌株选择第61页
  4.5.2 条件筛选第61-63页
 4.6 转化体的筛选第63-64页
 4.7 整合表达检测第64-71页
  4.7.1 报告基因检测第64-66页
  4.7.2 目的基因PCR检测第66页
  4.7.3 DNA杂交检测第66-70页
  4.7.4 表达活性检测第70-71页
 4.8 小结第71-72页
5 问题及讨论第72-75页
 5.1 取材问题第72页
 5.2 转化问题第72-73页
 5.3 转化体筛选问题第73-74页
 5.4 外源基因表达的检测问题第74-75页
6 附录:乙型肝炎表面抗原基因(HbsAg-s)在马铃薯中的表达第75-85页
参考文献第85-97页
致谢第97页

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