| 略语表 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| Ⅰ.前言 | 第12-13页 |
| Ⅱ.材料与方法 | 第13-30页 |
| 一.材料 | 第13-15页 |
| (一).实验动物 | 第13页 |
| (二).主要仪器及设备 | 第13-14页 |
| (三).主要试剂 | 第14-15页 |
| 二.方法 | 第15-30页 |
| (一).大鼠血管平滑肌细胞培养 | 第15-16页 |
| 1.贴块法培养主动脉平滑肌细胞 | 第15-16页 |
| 2.VSMC的鉴定 | 第16页 |
| 3.生长曲线的绘制 | 第16页 |
| (二).VSMC Ca~(2+)动力学分析 | 第16-23页 |
| 1.VSMC胞内及核内Ca~(2+)水平的测定 | 第16-17页 |
| (1).Fura-2／AM法 | 第16-17页 |
| (2).Fluo-3／AM及Hoechst 33342双染法 | 第17页 |
| 2.VSMC内钙调素活性的测定 | 第17-20页 |
| (1).样品的制备 | 第17页 |
| (2).样品蛋白含量的测定 | 第17-18页 |
| (3).钙调素活性的测定 | 第18-20页 |
| 3.红细胞膜ATP酶活性的测定 | 第20-22页 |
| (1).主要溶液的配制 | 第20页 |
| (2).红细胞膜的制备 | 第20页 |
| (3).ATP酶活性测定原理及操作步骤 | 第20-22页 |
| 4.VSMC内钙池分析 | 第22-23页 |
| (1).离体血管对不同激动剂的收缩反应 | 第22页 |
| (2).不同年龄大鼠VSMC内钙池大小的比较 | 第22-23页 |
| 5.离体血管磷酸肌醇各组分含量的测定 | 第23页 |
| (三).VSMC细胞周期的观察 | 第23-26页 |
| 1.用标记有丝分裂百分数法(PLM)测定VSMC细胞周期各时相的长度 | 第23-25页 |
| 2.用流式细胞仪进行细胞周期动态分析 | 第25-26页 |
| (四).VSMC的增殖及药物干预实验 | 第26页 |
| 1.~3H-TdR参入法检测DNA合成 | 第26页 |
| 2.MTT法测定VSMC的增殖 | 第26页 |
| (五).用原位杂交技术检测VSMC内PDGF及其受体基因的表达 | 第26-29页 |
| 1.溶液配制 | 第26-27页 |
| 2.探针的制备 | 第27-28页 |
| 3.探针的标记和检测 | 第28页 |
| 4.原位杂交 | 第28-29页 |
| (六).数据处理 | 第29-30页 |
| Ⅲ 实验结果 | 第30-64页 |
| 一.增龄对VSMC生长状态的影响 | 第30-36页 |
| (一).不同年龄大鼠VSMC的生长特性 | 第30-34页 |
| 1.不同年龄大鼠VSMC原代培养时光镜下的形态比较 | 第30-32页 |
| 2.VSMC的鉴定 | 第32页 |
| 3.不同年龄大鼠不同传代次数VSMC生长曲线的比较 | 第32-34页 |
| (二).不同年龄大鼠VSMC的增殖差异及药物干预 | 第34-36页 |
| 二.增龄对VSMC内游离Ca~(2+)代谢的影响 | 第36-56页 |
| (一).激动剂作用下胞浆游离Ca~(2+)浓度的变化 | 第36-38页 |
| ·mmol／L KCl对胞浆游离Ca~(2+)浓度的影响 | 第36页 |
| 2.NE对胞浆游离Ca~(2+)水平的影响及人参皂甙的干预作用 | 第36-38页 |
| 3.咖啡因对胞内Ca~(2+)释放的影响 | 第38页 |
| (二).激动剂作用下核内Ca~(2+)浓度的变化 | 第38-46页 |
| 1.细胞核位置的确定 | 第38-39页 |
| 2.NE作用下核内Ca~(2+)浓度的变化 | 第39-42页 |
| 3.CPA作用下核内Ca~(2+)浓度的变化 | 第42-46页 |
| (三).增龄对VSMC增殖周期中钙调素含量及Ca~(2+)水平的影响 | 第46-48页 |
| 1.细胞增殖周期中VSMC胞浆及核内Ca~(2+)浓度的变化 | 第46页 |
| 2.细胞增殖周期中VSMC内钙调素含量的变化 | 第46-48页 |
| (四).增龄对红细胞膜ATP酶活性的影响 | 第48-50页 |
| (五).不同年龄大鼠VSMC胞内钙池比较 | 第50-54页 |
| 1.离体血管对不同激动剂的收缩反应随增龄的变化 | 第50-53页 |
| 2.VSMC胞内钙池的比较 | 第53-54页 |
| (六).增龄对离体血管磷酸肌醇各组分含量的影响 | 第54-56页 |
| 三.增龄对VSMC周期的影响 | 第56-59页 |
| (一).增龄对VSMC细胞周期各时相长度的影响 | 第56-57页 |
| (二).增龄对VSMC细胞周期各时相细胞百分含量的影响 | 第57-59页 |
| 四.VSMC内PDGF及其受体基因表达的增龄改变及药物干预 | 第59-64页 |
| (一).原位杂交光镜下形态观察 | 第59-63页 |
| (二).原位杂交半定量 | 第63-64页 |
| Ⅳ.讨论 | 第64-71页 |
| 一.增龄过程中VSMC Ca~(2+)代谢的改变及其可能机制 | 第64-67页 |
| (一).胞浆内Ca~(2+)浓度变化调节 | 第65-66页 |
| (二).核内Ca~(2+)浓度变化的调节 | 第66-67页 |
| 二 增龄过程中VSMC增殖机制的探讨 | 第67-69页 |
| 三.结论 | 第69-71页 |
| Ⅴ.参考文献 | 第71-76页 |
| Ⅵ.文献综述 | 第76-95页 |
| 简历 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
