中文摘要 | 第1-14页 |
ABSTRACT | 第14-19页 |
前言 | 第19-27页 |
第一部分:ΔNp63 mRNA 和蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达 | 第27-38页 |
1 材料 | 第27-28页 |
·标本来源 | 第27页 |
·主要试剂 | 第27-28页 |
·主要仪器设备 | 第28页 |
2 方法 | 第28-33页 |
·免疫组化 | 第28-31页 |
·RT-PCR | 第31-33页 |
3 结果 | 第33-35页 |
4 讨论 | 第35-37页 |
参考文献 | 第37-38页 |
第二部分:ΔNp63 物异性shRNA 表达质粒的构建 | 第38-50页 |
1 材料 | 第38-41页 |
·细胞株 | 第38页 |
·质粒和菌株 | 第38-39页 |
·主要试剂 | 第39页 |
·试剂配制 | 第39-40页 |
·主要仪器设备 | 第40-41页 |
2 方法 | 第41-45页 |
·特异性shRNA 转录模板设计、合成 | 第41-42页 |
·shRNA 表达载体构建、鉴定 | 第42-43页 |
·ΔNp63 特异性shRNA 表达载体在TCCB 细胞株中表达 | 第43-44页 |
·RT-PCR 检测细胞内ΔNp63mRNA 表达 | 第44-45页 |
·数据处理 | 第45页 |
3 结果 | 第45-47页 |
·成功构建ΔNp63 特异性shRNA 表达质粒 | 第45页 |
·确定最合适质粒量与最佳转染时间 | 第45-46页 |
·确定最有效的阳性重组质粒 | 第46-47页 |
4 讨论 | 第47-49页 |
参考文献 | 第49-50页 |
第三部分:△Np63特异性shRNA在膀胱移行细胞癌中的体外效应研究 | 第50-60页 |
1 材料 | 第50-51页 |
·试剂 | 第50页 |
·主要仪器设备同第一、第二部分 | 第50-51页 |
·分组 | 第51页 |
2 方法 | 第51-53页 |
·细胞爬片的免疫组化 | 第51页 |
·RT-PCR | 第51-52页 |
·FCM 检测细胞周期 | 第52页 |
·MTT 检测细胞增殖活性 | 第52页 |
·统计学处理 | 第52-53页 |
3 结果 | 第53-55页 |
·ΔNp63-shRNA 抑制ΔNp63 蛋白的表达 | 第53页 |
·ΔNp63-shRNA 抑制cyclin D1 和ckd4 蛋白的表达 | 第53-54页 |
·ΔNp63-shRNA 抑制ΔNp63mRNA 的表达 | 第54页 |
·ΔNp63-shRNA 调控5637 细胞周期 | 第54-55页 |
·ΔNp63-shRNA 抑制5637 细胞增殖活性 | 第55页 |
4 讨论 | 第55-60页 |
第四部分:△Np63特异性shRNA在膀胱移行细胞癌中的体内效应研究 | 第60-67页 |
1 材料 | 第60-61页 |
·动物来源 | 第60页 |
·仪器设备及试剂 | 第60-61页 |
2 方法 | 第61-62页 |
·人膀胱癌裸鼠动物模型的建立 | 第61页 |
·ΔNp63-shRNA 表达质粒治疗 | 第61页 |
·移植瘤组织病理学观察 | 第61页 |
·移植瘤组织超微结构观察 | 第61页 |
·移植瘤组织RT-PCR 检测 | 第61-62页 |
·免疫组织化学 | 第62页 |
·统计学处理 | 第62页 |
3 结果 | 第62-64页 |
·荷瘤裸鼠的一般情况和毒副作用观察 | 第62页 |
·荷瘤裸鼠肿瘤生长受抑制情况 | 第62-63页 |
·肿瘤组织病理学和透射电镜结果 | 第63页 |
·ΔNp63mRNA 的表达 | 第63页 |
·ΔNp63 和cyclin D1 和cdk4 蛋白的表达 | 第63-64页 |
4 讨论 | 第64-67页 |
参考文献 | 第67-68页 |
全文结论 | 第68-69页 |
附图 | 第69-83页 |
文献综述 | 第83-90页 |
致谢 | 第90-92页 |
攻读博士学位期间研究成果及发表文章目录 | 第92页 |