| 缩写词及中英文对照 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 1 引言 | 第15-37页 |
| ·植物耐旱的生理生化反应 | 第15-18页 |
| ·气孔行为 | 第15-16页 |
| ·光合作用调节 | 第16页 |
| ·渗透调节 | 第16-17页 |
| ·逆境胁迫蛋白 | 第17页 |
| ·抗氧化系统的调节 | 第17-18页 |
| ·多胺类物质的耐旱性 | 第18页 |
| ·植物抗逆的信号转导 | 第18-23页 |
| ·感受胁迫信号或激素信号的双组分系统 | 第19页 |
| ·第二信使及激素信号 | 第19-23页 |
| ·植物抗逆的分子水平研究 | 第23-32页 |
| ·耐旱相关基因的表达调控 | 第23-26页 |
| ·热激转录因子和热激蛋白 | 第26-30页 |
| ·类胰蛋白丝氨酸蛋白酶与植物的抗逆性 | 第30-32页 |
| ·抑制差减杂交技术 | 第32-33页 |
| ·抑制差减杂交技术的原理和实验程序 | 第32-33页 |
| ·抑制差减杂交技术的特点及在玉米基因分离上的应用 | 第33页 |
| ·实时定量PCR分析基因的转录水平 | 第33-34页 |
| ·本研究的目的意义和技术路线 | 第34-37页 |
| ·目的意义 | 第34-35页 |
| ·技术路线 | 第35-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-53页 |
| ·玉米自交系材料 | 第37页 |
| ·克隆载体和转化菌株 | 第37页 |
| ·玉米自交系生长条件和水份胁迫处理 | 第37页 |
| ·叶片总RNA提取和mRNA纯化 | 第37-38页 |
| ·抑制差减杂交 | 第38-42页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第38-39页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第38页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第38-39页 |
| ·双链cDNA的Rsa Ⅰ酶切 | 第39页 |
| ·接头序列连接 | 第39-40页 |
| ·第一轮杂交 | 第40-41页 |
| ·第二轮杂交 | 第41页 |
| ·第一轮PCR扩增 | 第41页 |
| ·第二轮PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·差减后cDNA产物的克隆 | 第42页 |
| ·反式Northern杂交 | 第42-47页 |
| ·反式Northern主要试剂 | 第42-43页 |
| ·消减克隆斑点印迹膜制备 | 第43-44页 |
| ·PCR扩增差减克隆中的cDNA插入片段 | 第43-44页 |
| ·cDNA斑点印迹膜制备 | 第44页 |
| ·地高辛标记cDNA探针 | 第44-46页 |
| ·总RNA反转录为cDNA探针 | 第44-45页 |
| ·探针标记 | 第45页 |
| ·标记探针的定量 | 第45-46页 |
| ·杂交反应 | 第46-47页 |
| ·预杂交 | 第46-47页 |
| ·杂交 | 第47页 |
| ·杂交结果检测 | 第47页 |
| ·序列测定分析和基因功能预测 | 第47-48页 |
| ·实时定量PCR分析过程 | 第48-49页 |
| ·玉米自交系"87-1"中DegP基因的克隆 | 第49-53页 |
| ·"87-1"中DegP5'序列的克隆 | 第50-51页 |
| ·"87-1"DegP基因3'序列和中间序列的克隆 | 第51-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-74页 |
| ·叶片总RNA提取及浓度和纯度检测 | 第53页 |
| ·构建SSH文库cDNA合成及Rsa Ⅰ酶切效率分析 | 第53-54页 |
| ·正向差减后的cDNA | 第54-55页 |
| ·正向差减两轮PCR产物 | 第54页 |
| ·正向差减cDNA的克隆 | 第54-55页 |
| ·反式Northern鉴定的特异表达cDNA | 第55-56页 |
| ·标记探针的定量 | 第55页 |
| ·鉴定的特异表达cDNA | 第55-56页 |
| ·测序结果及相似性分析 | 第56-60页 |
| ·B1片段 | 第56-57页 |
| ·A2片段 | 第57-58页 |
| ·C4片段 | 第58页 |
| ·E4片段 | 第58-59页 |
| ·F4片段 | 第59-60页 |
| ·4个基因在水份胁迫的6个自交系中的表达模式 | 第60-64页 |
| ·实时定量PCR中5个基因引物的特异性 | 第60-61页 |
| ·4个基因在6个玉米自交系中的表达模式 | 第61-64页 |
| ·玉米自交系"87-1" DegP基因的序列 | 第64-66页 |
| ·"87-1"DegP基因的生物信息学分析 | 第66-74页 |
| ·"87-1"DegP基因的ORF分析 | 第66页 |
| ·自交系"87-1"DegP基因发生碱基缺失 | 第66-68页 |
| ·完整ORF的ZmDegP基因与"87-1"DegP基因的比对分析 | 第68页 |
| ·不同物种中DegP蛋白的结构分析 | 第68-72页 |
| ·玉米基因组中其它DegP基因的鉴定 | 第72-74页 |
| 4 讨论 | 第74-79页 |
| ·NADH脱氢酶与玉米耐早性的关系 | 第74页 |
| ·玉米DegP,PGAM-i,E4和F4基因对水份胁迫的响应 | 第74-76页 |
| ·水份胁迫下4个基因的表达模式表明它们响应水份胁迫 | 第74-75页 |
| ·自交系间对4个基因的转录调控有差异 | 第75-76页 |
| ·玉米的ZmDegP基因 | 第76-78页 |
| ·克隆的一个玉米DegP基因 | 第76-77页 |
| ·玉米中ZmDegP基因和水份胁迫的响应 | 第77页 |
| ·玉米基因组中存在DegP基因家族其它成员 | 第77-78页 |
| ·玉米基因ZmDegP的突变和序列多样性 | 第78-79页 |
| 附录A 玉米ZmDegP基因的构建 | 第79-84页 |
| 附录B 实验中所用到的分子生物学方法 | 第84-89页 |
| 方法1 玉米叶片总RNA提取 | 第84页 |
| 方法2 RNA样品的Dnase Ⅰ处理 | 第84-85页 |
| 方法3 mRNA分离纯化 | 第85-86页 |
| 方法4 PCR产物的回收与纯化 | 第86页 |
| 方法5 感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第86-87页 |
| 方法6 连接反应 | 第87页 |
| 方法7 热激转化重组载体 | 第87页 |
| 方法8 质粒DNA提取 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第108页 |
