| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-21页 |
| 1 生长素结合蛋白ABP1 | 第10-14页 |
| ·ABP1的基因 | 第11-12页 |
| ·ABP1的结构 | 第12页 |
| ·ABP1的作用特点 | 第12页 |
| ·ABP1与生长素的相互作用机制 | 第12-14页 |
| ·ABP1控制细胞分裂和生长素响应基因的表达 | 第12-13页 |
| ·ABP1介导生长素控制的细胞形态建成 | 第13-14页 |
| ·ABP1介导内吞作用 | 第14页 |
| 2 大肠杆菌表达系统 | 第14-20页 |
| ·大肠杆菌的表达体系 | 第15页 |
| ·大肠杆菌表达载体的结构 | 第15-16页 |
| ·大肠杆菌的质粒载体 | 第16-18页 |
| ·pBR322质粒 | 第16-17页 |
| ·pUC8质粒 | 第17页 |
| ·pGEM-Z质粒 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌高效表达的影响因素 | 第18-20页 |
| ·载体启动子的选择 | 第18页 |
| ·mRNA的稳定性 | 第18-19页 |
| ·外源密码子的使用 | 第19页 |
| ·培养条件的控制 | 第19-20页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 拟南芥生长素结合蛋白ABP1的原核表达 | 第21-34页 |
| 1 材料 | 第21-22页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·质粒和原核表达菌株 | 第21页 |
| ·工具酶和试剂 | 第21页 |
| ·本研究所需仪器 | 第21-22页 |
| 2 方法 | 第22-31页 |
| ·ABP1基因cDNA克隆 | 第22-27页 |
| ·拟南芥RNA提取 | 第22页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第22-23页 |
| ·RT-PCR扩增ABP1cDNA | 第23页 |
| ·DNA凝胶电泳及扩增产物的回收 | 第23-24页 |
| ·ABP1基因cDNA扩增回收产物与pMD18-T载体的连接 | 第24页 |
| ·Top10感受态的制备 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第25页 |
| ·重组转化子鉴定 | 第25-27页 |
| ·拟南芥ABP1基因原核表达载体的构建 | 第27-30页 |
| ·引物的设计 | 第27页 |
| ·PCR扩增 | 第27页 |
| ·ABP1-T与pMD18-T载体的连接 | 第27-28页 |
| ·pMD18-T-ABP1的大肠杆菌转化 | 第28页 |
| ·重组转化子pMD18-T-ABP1的鉴定 | 第28-30页 |
| ·构建表达载体 | 第30页 |
| ·拟南芥ABP1基因的原核表达 | 第30-31页 |
| ·pGEX4T-1-ABP1重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-33页 |
| ·ABP1基因的原核表达 | 第31-33页 |
| ·ABP1基因的cDNA克隆 | 第31页 |
| ·原核表达载体pGEX4T-1-ABP1的酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·pGEX4T-1-ABP1重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 拟南芥生长素结合蛋白ABP1的蛋白纯化 | 第34-43页 |
| 1 材料 | 第34页 |
| ·菌株材料 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-37页 |
| ·ABP1融合蛋白表达形式的鉴定 | 第34-35页 |
| ·ABP1蛋白原核表达的条件优化 | 第35页 |
| ·ABP1融合蛋白的纯化 | 第35-37页 |
| ·大规模诱导融合蛋白的表达 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌细胞的破碎 | 第36页 |
| ·GST珠子纯化蛋白 | 第36页 |
| ·融合蛋白的检测 | 第36-37页 |
| ·目的蛋白质浓度的测定 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-42页 |
| ·ABP1蛋白表达形式的鉴定 | 第37-38页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第38-40页 |
| ·诱导时间的确定 | 第38页 |
| ·诱导温度的确定 | 第38-39页 |
| ·诱导剂浓度的确定 | 第39-40页 |
| ·ABP1蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第40-42页 |
| ·工作液的配制 | 第41页 |
| ·BCA标准品和样品的准备 | 第41页 |
| ·样品处理 | 第41页 |
| ·样品与标准品吸光值的测定 | 第41页 |
| ·标准曲线的制作及蛋白质浓度的计算 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 全文总结 | 第43-44页 |
| 1 论文小结 | 第43页 |
| 2 后续设想 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
