无色孔雀石绿单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-17页 |
| 文献综述 | 第17-25页 |
| 1 食品中兽药残留现状 | 第17页 |
| 2 孔雀石绿残留与分析 | 第17-25页 |
| ·孔雀石绿概况 | 第17-18页 |
| ·MG 的应用 | 第18页 |
| ·MG 的残留 | 第18-19页 |
| ·MG 的危害 | 第19-20页 |
| ·MG 的残留检测分析 | 第20-25页 |
| 引言 | 第25-27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-37页 |
| ·试验动物及细胞系 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第27-33页 |
| ·小鼠免疫 | 第27-28页 |
| ·小鼠血清抗体效价和特异性测定 | 第28页 |
| ·双向免疫扩散法测定小鼠多抗 | 第28-29页 |
| ·细胞准备 | 第29-30页 |
| ·细胞融合 | 第30页 |
| ·阳性细胞孔的筛选 | 第30-31页 |
| ·阳性孔细胞的克隆化 | 第31页 |
| ·杂交瘤细胞染色体记数 | 第31-32页 |
| ·单抗型及亚型鉴定 | 第32页 |
| ·LMG 50%抑制质量浓度的测定 | 第32页 |
| ·McAb 特异性鉴定 | 第32-33页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第33页 |
| ·腹水的制备与纯化 | 第33-34页 |
| ·腹水的制备 | 第33页 |
| ·腹水的纯化 | 第33-34页 |
| ·腹水特异性分析 | 第34页 |
| ·酶标板的选择 | 第34页 |
| ·酶标板均匀度的比较 | 第34页 |
| ·酶标板结合率的比较 | 第34页 |
| ·最佳包被原、抗体工作浓度的确定 | 第34-35页 |
| ·ciELISA 法的建立 | 第35页 |
| ·ciELISA 法条件的优化 | 第35页 |
| ·包被时间和条件的确定 | 第35页 |
| ·封闭液条件的确定 | 第35页 |
| ·抗原抗体作用时间的确定 | 第35页 |
| ·抗体工作液pH 值的选择 | 第35页 |
| ·底物作用时间的确定 | 第35页 |
| ·ciELISA 方法灵敏度分析 | 第35页 |
| ·添加回收率的测定 | 第35-37页 |
| ·样品中LMG 的提取 | 第35-36页 |
| ·固相萃取净化样品 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-44页 |
| ·小鼠多抗血清效价和特异性 | 第37页 |
| ·多抗血清效价测定 | 第37页 |
| ·特异性分析 | 第37页 |
| ·双向免疫扩散法测定抗体效价测定 | 第37-38页 |
| ·细胞融合及杂交瘤细胞筛选 | 第38-39页 |
| ·融合细胞的观察 | 第38页 |
| ·细胞融合筛选杂交瘤细胞株的稳定性及抗体效价 | 第38-39页 |
| ·单抗亚型分析 | 第39页 |
| ·杂交瘤细胞染色体计数 | 第39页 |
| ·LMG McAb 50% 抑制质量浓度的测定 | 第39-40页 |
| ·LMG McAb 交叉反应率 | 第40页 |
| ·纯化腹水蛋白浓度测定 | 第40页 |
| ·腹水效价测定 | 第40页 |
| ·腹水特异性分析 | 第40-41页 |
| ·酶标板的均匀度和结合率 | 第41页 |
| ·包被原和抗体工作浓度的确定 | 第41页 |
| ·LMG 间接竞争ELISA 法条件的优化 | 第41-43页 |
| ·包被时间的确定 | 第41-42页 |
| ·封闭液条件的确定 | 第42页 |
| ·抗原抗体温育时间的确定 | 第42页 |
| ·抗体工作液pH 值的选择 | 第42-43页 |
| ·底物作用时间的确定 | 第43页 |
| ·ciELISA 方法灵敏度分析 | 第43页 |
| ·添加回收率测定 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-49页 |
| ·动物免疫 | 第44页 |
| ·细胞融合 | 第44页 |
| ·饲养层细胞 | 第44-45页 |
| ·阳性细胞克隆化筛选 | 第45页 |
| ·筛选时间 | 第45页 |
| ·筛选方法 | 第45页 |
| ·抗体效价测定 | 第45页 |
| ·交叉反应率 | 第45-46页 |
| ·酶标板的选择 | 第46页 |
| ·ELISA 方法灵敏度 | 第46-47页 |
| ·包被原的确定 | 第46页 |
| ·抗体浓度的确定 | 第46页 |
| ·封闭液和封闭时间的选择 | 第46-47页 |
| ·抗原抗体温育时间的确定 | 第47页 |
| ·抗体工作液pH 值的选择 | 第47页 |
| ·底物作用的时间 | 第47页 |
| ·洗涤 | 第47页 |
| ·ELISA 方法特异性 | 第47页 |
| ·样品前处理 | 第47-48页 |
| ·研究意义 | 第48页 |
| ·McAb 研究前景 | 第48-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
