中文摘要 | 第1-10页 |
英文摘要 | 第10-13页 |
前言 | 第13-16页 |
第1部分 淡色库蚊RPL22 克隆与鉴定 | 第16-31页 |
材料与方法 | 第16-25页 |
一、材料 | 第16-18页 |
(一) 供试蚊 | 第16页 |
(二) 主要试剂 | 第16-17页 |
(三) 主要仪器 | 第17-18页 |
二、方法 | 第18-25页 |
(一) 淡色库蚊RPL22 克隆 | 第18-24页 |
(二) 生物信息学分析 | 第24-25页 |
结果 | 第25-30页 |
一、淡色库蚊RPL22 克隆 | 第25-26页 |
(一) 成蚊 RNA 的提取、鉴定 | 第25页 |
(二) 5'-RACE 及3'-RACE 法扩增RPL22 全长序列 | 第25-26页 |
二、生物信息学分析 | 第26-30页 |
(一) 序列分析 | 第26页 |
(二) 进化树分析 | 第26-30页 |
讨论 | 第30-31页 |
第2部分 RPL22 高表达和低表达对蚊细胞溴氰菊酯敏感性的影响 | 第31-65页 |
材料与方法 | 第31-52页 |
一、材料 | 第31-32页 |
(一) 实验对象 | 第31-32页 |
(二) 主要试剂 | 第32页 |
(三) 主要仪器 | 第32页 |
二、方法 | 第32-52页 |
(一) 淡色库蚊 RPL22 在敏感和抗性品系中的表达 | 第32-34页 |
(二) 淡色库蚊 RPL22 高表达对蚊细胞溴氰菊酯敏感性的影响 | 第34-47页 |
(三) RPL22 低表达对抗药性蚊细胞溴氰菊酯抗性的影响 | 第47-51页 |
(四) 统计学分析 | 第51-52页 |
结果 | 第52-62页 |
一、淡色库蚊RPL22 在敏感和抗性品系中的表达 | 第52页 |
二、淡色库蚊 RPL22 高表达对蚊细胞溴氰菊酯敏感性的影响 | 第52-57页 |
(一) 淡色库蚊 RPL22 昆虫细胞表达载体的构建 | 第52-53页 |
(二) 淡色库蚊RPL22 转染蚊细胞和稳定转染细胞系的建立 | 第53-55页 |
(三) 淡色库蚊 RPL22 高表达后蚊细胞对溴氰菊酯敏感性的变化 | 第55页 |
(四) 分析RPL22 高表达后CYP6A1 的表达 | 第55-57页 |
三、RPL22 低表达对抗药性蚊细胞溴氰菊酯抗性的影响 | 第57-62页 |
(一) 蚊C6/36 细胞 RPL22 的扩增 | 第57页 |
(二) 抗药性蚊C6/36 细胞的筛选 | 第57页 |
(三) 分析 RPL22 在溴氰菊酯敏感和抗性细胞中的表达 | 第57-58页 |
(四) siRNA 干涉蚊抗药性细胞RPL22 的转染效率和干涉效率 | 第58-59页 |
(五) siRNA 干涉RPL22 后抗药性细胞对溴氰菊酯抗性的变化 | 第59-60页 |
(六) 分析siRNA 干涉RPL22 后抗药性细胞中CYP6A1 的表达 | 第60-62页 |
讨论 | 第62-65页 |
第3部分 RPL22 适度高表达对蚊细胞溴氰菊酯敏感性的影响 | 第65-77页 |
材料与方法 | 第65-71页 |
一、材料 | 第65-66页 |
(一) 实验对象 | 第65-66页 |
(二) 主要试剂 | 第66页 |
(三) 主要仪器 | 第66页 |
二、方法 | 第66-71页 |
(一) 诱导型表达载体的构建 | 第66-69页 |
(二) 诱导剂剂量和诱导时间的选择 | 第69-70页 |
(三) 诱导RPL22 适度高表达对蚊细胞溴氰菊酯敏感性的影响 | 第70页 |
(四) 统计学分析 | 第70-71页 |
结果 | 第71-74页 |
一、诱导型表达载体的构建 | 第71-72页 |
(一) 扩增金属硫蛋白启动子 | 第71页 |
(二) 双酶切Mtn 启动子PCR 产物、pIB质粒 | 第71-72页 |
(三) 构建诱导型RPL22 表达载体及空载 | 第72页 |
二、诱导剂剂量和诱导时间的选择 | 第72-73页 |
(一) 瞬时转染后不同诱导时间的选择 | 第72页 |
(二) 瞬时转染后不同诱导剂剂量的选择 | 第72-73页 |
三、诱导RPL22 适度高表达后蚊细胞对溴氰菊酯抗性的变化 | 第73-74页 |
讨论 | 第74-77页 |
第4部分 淡色库蚊RPL22 在不同发育阶段中的表达 | 第77-81页 |
材料与方法 | 第77-79页 |
一、材料 | 第77-78页 |
(一) 供试蚊 | 第77页 |
(二) 主要试剂 | 第77-78页 |
(三) 主要仪器 | 第78页 |
二、方法 | 第78-79页 |
(一) 淡色库蚊各发育阶段 RNA 提取与反转录 | 第78页 |
(二) 分析淡色库蚊RPL22 在各发育阶段中的表达 | 第78-79页 |
结果 | 第79-80页 |
淡色库蚊RPL22 在不同发育阶段中的表达 | 第79-80页 |
讨论 | 第80-81页 |
小结 | 第81-82页 |
参考文献 | 第82-90页 |
综述 | 第90-104页 |
参考文献 | 第100-104页 |
附录:在读期间发表的SCI 论文 | 第104-111页 |
在读期间发表的论文和报告的新序列目录 | 第111-112页 |
致谢 | 第112页 |