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淡色库蚊核糖体蛋白L22基因(RPL22)克隆及其与溴氰菊酯抗性关系的研究

中文摘要第1-10页
英文摘要第10-13页
前言第13-16页
第1部分 淡色库蚊RPL22 克隆与鉴定第16-31页
 材料与方法第16-25页
  一、材料第16-18页
   (一) 供试蚊第16页
   (二) 主要试剂第16-17页
   (三) 主要仪器第17-18页
  二、方法第18-25页
   (一) 淡色库蚊RPL22 克隆第18-24页
   (二) 生物信息学分析第24-25页
 结果第25-30页
  一、淡色库蚊RPL22 克隆第25-26页
   (一) 成蚊 RNA 的提取、鉴定第25页
   (二) 5'-RACE 及3'-RACE 法扩增RPL22 全长序列第25-26页
  二、生物信息学分析第26-30页
   (一) 序列分析第26页
   (二) 进化树分析第26-30页
 讨论第30-31页
第2部分 RPL22 高表达和低表达对蚊细胞溴氰菊酯敏感性的影响第31-65页
 材料与方法第31-52页
  一、材料第31-32页
   (一) 实验对象第31-32页
   (二) 主要试剂第32页
   (三) 主要仪器第32页
  二、方法第32-52页
   (一) 淡色库蚊 RPL22 在敏感和抗性品系中的表达第32-34页
   (二) 淡色库蚊 RPL22 高表达对蚊细胞溴氰菊酯敏感性的影响第34-47页
   (三) RPL22 低表达对抗药性蚊细胞溴氰菊酯抗性的影响第47-51页
   (四) 统计学分析第51-52页
 结果第52-62页
  一、淡色库蚊RPL22 在敏感和抗性品系中的表达第52页
  二、淡色库蚊 RPL22 高表达对蚊细胞溴氰菊酯敏感性的影响第52-57页
   (一) 淡色库蚊 RPL22 昆虫细胞表达载体的构建第52-53页
   (二) 淡色库蚊RPL22 转染蚊细胞和稳定转染细胞系的建立第53-55页
   (三) 淡色库蚊 RPL22 高表达后蚊细胞对溴氰菊酯敏感性的变化第55页
   (四) 分析RPL22 高表达后CYP6A1 的表达第55-57页
  三、RPL22 低表达对抗药性蚊细胞溴氰菊酯抗性的影响第57-62页
   (一) 蚊C6/36 细胞 RPL22 的扩增第57页
   (二) 抗药性蚊C6/36 细胞的筛选第57页
   (三) 分析 RPL22 在溴氰菊酯敏感和抗性细胞中的表达第57-58页
   (四) siRNA 干涉蚊抗药性细胞RPL22 的转染效率和干涉效率第58-59页
   (五) siRNA 干涉RPL22 后抗药性细胞对溴氰菊酯抗性的变化第59-60页
   (六) 分析siRNA 干涉RPL22 后抗药性细胞中CYP6A1 的表达第60-62页
 讨论第62-65页
第3部分 RPL22 适度高表达对蚊细胞溴氰菊酯敏感性的影响第65-77页
 材料与方法第65-71页
  一、材料第65-66页
   (一) 实验对象第65-66页
   (二) 主要试剂第66页
   (三) 主要仪器第66页
  二、方法第66-71页
   (一) 诱导型表达载体的构建第66-69页
   (二) 诱导剂剂量和诱导时间的选择第69-70页
   (三) 诱导RPL22 适度高表达对蚊细胞溴氰菊酯敏感性的影响第70页
   (四) 统计学分析第70-71页
 结果第71-74页
  一、诱导型表达载体的构建第71-72页
   (一) 扩增金属硫蛋白启动子第71页
   (二) 双酶切Mtn 启动子PCR 产物、pIB质粒第71-72页
   (三) 构建诱导型RPL22 表达载体及空载第72页
  二、诱导剂剂量和诱导时间的选择第72-73页
   (一) 瞬时转染后不同诱导时间的选择第72页
   (二) 瞬时转染后不同诱导剂剂量的选择第72-73页
  三、诱导RPL22 适度高表达后蚊细胞对溴氰菊酯抗性的变化第73-74页
 讨论第74-77页
第4部分 淡色库蚊RPL22 在不同发育阶段中的表达第77-81页
 材料与方法第77-79页
  一、材料第77-78页
   (一) 供试蚊第77页
   (二) 主要试剂第77-78页
   (三) 主要仪器第78页
  二、方法第78-79页
   (一) 淡色库蚊各发育阶段 RNA 提取与反转录第78页
   (二) 分析淡色库蚊RPL22 在各发育阶段中的表达第78-79页
 结果第79-80页
  淡色库蚊RPL22 在不同发育阶段中的表达第79-80页
 讨论第80-81页
小结第81-82页
参考文献第82-90页
综述第90-104页
 参考文献第100-104页
附录:在读期间发表的SCI 论文第104-111页
在读期间发表的论文和报告的新序列目录第111-112页
致谢第112页

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