| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·海藻糖的结构及理化性质 | 第13-14页 |
| ·海藻糖的独特生物学功能及作用机理 | 第14-16页 |
| ·能源和碳源 | 第14页 |
| ·蛋白质和细胞膜的稳定剂和保护剂 | 第14-15页 |
| ·细胞抗热胁迫的保护剂 | 第15页 |
| ·细胞抗氧自由基损害的保护剂 | 第15-16页 |
| ·抗冻保护剂 | 第16页 |
| ·海藻糖保护生物分子的机理 | 第16页 |
| ·海藻糖的应用 | 第16-20页 |
| ·海藻糖在食品工业中的应用 | 第16-18页 |
| ·在生物工程领域中的应用 | 第18-19页 |
| ·在医药领域中的应用 | 第19-20页 |
| ·在农业上的应用 | 第20页 |
| ·海藻糖的制备方法 | 第20-21页 |
| ·化学合成法 | 第20页 |
| ·微生物抽提法 | 第20-21页 |
| ·酶合成法 | 第21页 |
| ·酶法合成海藻糖的研究进展 | 第21-26页 |
| ·OtsA－OtsB途径 | 第22-23页 |
| ·TreS途径 | 第23页 |
| ·TreY－TreZ途径 | 第23-25页 |
| ·其他途径 | 第25-26页 |
| ·立题背景及任务 | 第26-27页 |
| 第二章 基因的克隆 | 第27-35页 |
| ·材料和方法 | 第27-32页 |
| ·菌株和质粒 | 第27页 |
| ·工具酶和试剂 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·质粒抽提溶液 | 第27页 |
| ·核酸电泳溶液 | 第27-28页 |
| ·其他溶液 | 第28页 |
| ·常用仪器 | 第28页 |
| ·谷氨酸棒杆菌基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·PCR扩增目的基因片段 | 第29页 |
| ·目的基因片段的回收 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的连接 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞 | 第30-31页 |
| ·SDS碱裂解法小量制备质粒 | 第31页 |
| ·重组单克隆的PCR验证 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-34页 |
| ·海藻糖合成相关酶基因的克隆 | 第32页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第32-33页 |
| ·序列测定及分析 | 第33-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 重组载体的构建及其在大肠杆菌中的诱导表达 | 第35-52页 |
| ·材料和方法 | 第35-39页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·工具酶和试剂 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·其他溶液 | 第35页 |
| ·常用仪器 | 第35页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·质粒的酶切，CIAP脱磷反应及DNA片段的连接 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE用溶液 | 第36-37页 |
| ·蛋白纯化用溶液 | 第37页 |
| ·重组菌的诱导表达及表达产物的SDS-PAGE分析 | 第37页 |
| ·不同诱导温度下目的蛋白的表达 | 第37-38页 |
| ·不同诱导物浓度下目的蛋白的表达 | 第38页 |
| ·不同诱导时间下目的蛋白的表达 | 第38页 |
| ·非变性条件下抽提His Tag蛋白质 | 第38-39页 |
| ·Bradford蛋白定量 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-50页 |
| ·重组表达载体的构建及阳性克隆的筛选 | 第39-41页 |
| ·转化表达宿主菌BL21（DE3）pLysS及阳性克隆的筛选 | 第41-43页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| ·不同诱导温度下目的蛋白的表达 | 第44-46页 |
| ·IPTG浓度对目的蛋白表达的影响 | 第46-48页 |
| ·诱导时间对目的蛋白表达的影响 | 第48页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第48-50页 |
| ·蛋白含量测定 | 第50页 |
| ·本章小结 | 第50-52页 |
| 第四章 重组酶酶学性质研究 | 第52-59页 |
| ·材料和方法 | 第52-53页 |
| ·工具酶和试剂 | 第52页 |
| ·薄层色谱分析用溶液 | 第52页 |
| ·常用仪器 | 第52页 |
| ·DNS法测定麦芽糊精标准准曲线的制作 | 第52页 |
| ·DNS法测定葡萄糖含量标准曲线的制作 | 第52-53页 |
| ·重组酶的活性测定 | 第53页 |
| ·薄层色谱（TLC）法检测 | 第53页 |
| ·重组麦芽寡糖基海藻糖合酶最适反应温度及热稳定性测定 | 第53页 |
| ·重组麦芽寡糖基海藻糖合酶最适反应pH及pH稳定性测定 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-58页 |
| ·DNS法测定麦芽糊精标准准曲线的制作 | 第53-54页 |
| ·DNS法测定葡萄糖含量标准曲线的制作 | 第54-55页 |
| ·重组MTSase最适反应温度及热稳定性测定 | 第55-56页 |
| ·重组 MTSase 最适反应 pH 及 pH 稳定性 | 第56-57页 |
| ·重组MTSase基因工程菌产酶活力 | 第57页 |
| ·重组MTHase的酶活测定 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 第五章 谷氨酸棒杆菌treY基因和treZ基因在毕氏酵母中表达的尝试 | 第59-70页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·菌种和载体 | 第59页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第59页 |
| ·试剂盒 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59-60页 |
| ·酵母培养基用储液 | 第60页 |
| ·酵母原生质体制备及转化溶液 | 第60页 |
| ·其他溶液 | 第60页 |
| ·仪器 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-64页 |
| ·treY基因和treZ基因酶切位点改造 | 第60-61页 |
| ·treY基因和treZ基因毕氏酵母表达载体的构建 | 第61页 |
| ·pPIC9K的酶切与去磷酸化 | 第61页 |
| ·连接反应 | 第61-62页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第62页 |
| ·筛选重组子 | 第62页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第62页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第62-63页 |
| ·毕赤酵母感受态的制备 | 第63页 |
| ·转化毕赤酵母 | 第63页 |
| ·甲醇利用表型的确定 | 第63-64页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第64页 |
| ·重组酵母的PCR验证 | 第64页 |
| ·目的基因在毕赤酵母中的表达 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-69页 |
| ·毕氏酵母表达载体的构建 | 第64-66页 |
| ·重组酵母甲醇利用表型的确定 | 第66页 |
| ·重组毕赤酵母的PCR鉴定 | 第66-68页 |
| ·treZ基因重组毕赤酵母的初步摇瓶诱导 | 第68-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 第六章 结论与下步工作设想 | 第70-72页 |
| ·主要研究结论 | 第70-71页 |
| ·本研究的创新点 | 第71页 |
| ·进一步工作设想 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简介 | 第80页 |
