| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 一.前言 | 第9-17页 |
| 1. Ⅱ型猪链球菌简介 | 第9页 |
| 2. 细菌毒力基因体内表达检测技术研究进展 | 第9-13页 |
| 3. Ⅱ型猪链球菌毒力因子研究进展 | 第13页 |
| 4. 体内表达技术应用于基因筛选的策略 | 第13-16页 |
| 5. 本文的研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 二.技术路线 | 第17-22页 |
| 1. Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因表达文库的构建技术路线 | 第18-20页 |
| 2. Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因的筛选与生物信息学分析技术路线 | 第20-22页 |
| 三.材料与方法 | 第22-39页 |
| 1. 实验材料 | 第22-24页 |
| 2. 实验仪器 | 第24页 |
| 3. 主要试剂的配制 | 第24-28页 |
| 4. 引物 | 第28页 |
| 5. 实验方法 | 第28-39页 |
| ·基本实验操作 | 第28-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞 | 第29页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒提取 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖电泳检侧 | 第30页 |
| ·目的DNA片段的回收和纯化 | 第30-31页 |
| ·Ⅱ型猪链球菌电转化感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·电转化Ⅱ型猪链球菌感受态细胞 | 第31-32页 |
| ·Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因表达文库的构建 | 第32-36页 |
| ·cat报告质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·cat报告质粒的鉴定 | 第33页 |
| ·Ⅱ型猪链球菌基因组DNA随机片段的获得 | 第33-34页 |
| ·体内诱导基因表达文库的构建 | 第34-36页 |
| ·Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因的筛选与生物信息学分析 | 第36-39页 |
| ·乳兔感染模型筛选Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因 | 第36-37页 |
| ·包含体内诱导基因的Ⅱ型猪链球菌染色体DNA的提取 | 第37页 |
| ·Sal Ⅰ酶切包含体内诱导基因的Ⅱ型猪链球菌染色体DNA | 第37页 |
| ·酶切片段的自身环化 | 第37-38页 |
| ·生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 四.实验结果 | 第39-52页 |
| 1. cat报告质粒的构建及鉴定 | 第39-41页 |
| ·cat基因的克隆和重组质粒的获得 | 第39-40页 |
| ·cat报告质粒的构建 | 第40页 |
| ·cat报告质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| 2. 体内诱导基因表达文库的构建 | 第41-44页 |
| ·SS2CVCC607基因组DNA随机片段的分离 | 第41-42页 |
| ·含随机片段融合基因文库的构建 | 第42-43页 |
| ·文库插入率 | 第43-44页 |
| ·体内诱导基因表达文库的构建 | 第44页 |
| ·体内诱导基因表达文库的鉴定 | 第44页 |
| 3. Ⅱ型猪链球菌体内诱导基因的体内、体外筛选 | 第44-45页 |
| 4. 酶切自连法获得含体内诱导基因的重组质粒的克隆 | 第45-46页 |
| 5. 肺炎链球菌体内诱导基因片段的生物信息学分析 | 第46-52页 |
| 五.讨论 | 第52-57页 |
| 六.小结 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 缩略语表 | 第66-68页 |
