| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| ·基因工程抗体 | 第12-14页 |
| ·抗体融合蛋白 | 第12页 |
| ·抗体的人源化 | 第12-13页 |
| ·单链抗体 | 第13-14页 |
| ·多价抗体 | 第14页 |
| ·单链抗体 | 第14-16页 |
| ·单链抗体的产生 | 第14-15页 |
| ·单链抗体的基因来源 | 第15页 |
| ·单链抗体与效应蛋白的融合 | 第15页 |
| ·单链抗体的研究进展 | 第15-16页 |
| ·单链抗体的应用 | 第16页 |
| ·鹅细小病毒（GPV）概述 | 第16-19页 |
| ·鹅细小病毒的形态 | 第16页 |
| ·鹅细小病毒的基因组结构 | 第16-17页 |
| ·鹅细小病毒的非结构蛋白 | 第17-18页 |
| ·小鹅瘟诊断方法 | 第18-19页 |
| ·γ干扰素(IFN-γ)概述 | 第19-20页 |
| ·干扰素分类 | 第19页 |
| ·γ干扰素的产生 | 第19页 |
| ·IFN-γ的生物学活性 | 第19-20页 |
| ·研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌种与载体 | 第22页 |
| ·细胞株 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·引物设计与合成 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-24页 |
| ·主要溶液配制 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-36页 |
| ·杂交瘤细胞株复苏 | 第25页 |
| ·杂交瘤细胞总 RNA 的提取 | 第25页 |
| ·第一链cDNA 的合成 | 第25-26页 |
| ·可变区基因克隆及鉴定 | 第26-28页 |
| ·PCR 产物测序 | 第28-29页 |
| ·单链抗体基因(ScFv)的构建 | 第29-32页 |
| ·ScFv 重组表达载体构建 | 第32-33页 |
| ·单链抗体的表达及纯化 | 第33-34页 |
| ·检测抗原的制备 | 第34-35页 |
| ·单链抗体的抗原结合活性检测 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-46页 |
| ·VH 和VL 基因的PCR 扩增与鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒pMD18-T-X 酶切鉴定（X 为克隆的基因片段） | 第36-38页 |
| ·抗体可变区 CDR 氨基酸序列分析 | 第38-39页 |
| ·ScFv 基因构建 | 第39页 |
| ·ScFv 重组质粒的构建 | 第39-41页 |
| ·GPV-NS1-ScFv 重组质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·GoIFN-γ-ScFv 重组质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·序列测定及分析 | 第41-43页 |
| ·ScFv 蛋白的表达及纯化 | 第43-44页 |
| ·GPV-NS1-ScFv 蛋白的表达及纯化 | 第43页 |
| ·GoIFN-γ-ScFv 蛋白的表达及纯化 | 第43-44页 |
| ·检测抗原的表达 | 第44-45页 |
| ·pGEX-GPV-NS1 截短蛋白(485～542aa)的表达及纯化 | 第44页 |
| ·GoIFN-γ蛋白的表达 | 第44-45页 |
| ·ScFv 结合活性 | 第45-46页 |
| ·抗 GPV-NS1 单链抗体的抗原结合活性 | 第45页 |
| ·抗GoIFN-γ-ScFv 的抗原结合活性 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| ·扩增抗体可变区引物设计 | 第46页 |
| ·单链抗体基因的构建 | 第46页 |
| ·ScFv 基因序列的分析 | 第46-47页 |
| ·ScFv 蛋白的复性 | 第47页 |
| ·活性初步测定 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第55页 |